176260. lajstromszámú szabadalom • Eljárás emkefelin-analóg polipeptidek előállítására

9

i76260

10

A példákban feltüntetett Rf-értékeket szilikagél-vékonyrétegen (Kieselgel G), felfelé futtatással határoztuk meg. A következő oldószer-rendszereket alkalmaztuk:

A) rendszer: 4:1:5 térfogatarányú bután-l-ol :

: ecetsav : víz elegy,

B) rendszer: 15 :3 :12 :10 térfogatarányú

bután-l-ol : ecetsav : víz :

: piridin elegy,

C) rendszer: 3 :1 térfogatarányú bután-2-ol :

: 3 vegyes %-os vizes ammóniumhidroxid-oldat elegy,

D) rendszer: 3 :1 térfogatarányú acetonitril : víz elegy,

F) rendszer: 1 :4 térfogatarányú kloroform :

: etanol elegy,

E) rendszer: 1 :1 térfogatarányú aceton :

: kloroform elegy,

G) rendszer: 1 :1 térfogatarányú ciklohexán :

: etilacetát elegy,

H) rendszer: 1:1:1 térfogatarányú ciklohexán : etilacetát : metanol elegy,

K) rendszer: 11 :8 :2 térfogatarányú

kloroform : metanol :

: víz elegy,

P) rendszer: 19 :1 térfogatarányú kloroform :

: metanol elegy,

Q) rendszer: 9 :1 térfogatarányú kloroform :

: metanol elegy.

(A G), K), Q) és P) rendszert a szilikagél-oszlopon végzett kromatografáláshoz is felhasználtuk.) A kromatográfiás lemezeket ultraibolya fényben vizsgáltuk, előhívószerként fluoreszcamint, ninlúdrint, illetve klór-keményítő-jód rendszert alkalmaztunk. Amennyiben egyebet nem közlünk, az Rf jelölés egyben azt is jelenti, hogy a kromatogramon csak egyetlen folt észlelhető.

Az 1—93. példákban ismertetett vegyületek savas hidrolízise során a pepiidet vagy a védett pepiidet 1 vegyes % fenolt tartalmazó 6 n vizes sósavoldatban, zárt, evakuált csőben 16 órán át 110 °C-on melegítettük. Az így kapott hidrolizátumok aminosav-összetételét LoCarts Amino—Acid Analyser készülékkel határoztuk meg. Az észlelt aminosav-összetételek minden esetben megfeleltek a várt szerkezetnek.

A példákban alkalmazott rövidítések jelentése a

következő:

Me

— metil-csoport,

Bu*

= terc-butil-csoport,

Ac

= acetil-csoport,

Et

= etil-csoport,

Ph

= fenü-csoport,

Z

= benzüoxikarbonil-c$oport,

Bzl

= benzil-csoport,

OCp

= 2,4,5-triklôr-fenoxi-csoport,

Boc

= terc-butoxikarbonfl-csoport,

ONp

= p-nitro-fenoxi-csoport,

ONSu

= szukcinimidooxi-csoport,

TosOH

= p-toluolszulfonsav,

DMF

s dimetilformamid,

TFA

3 trifluorecetsav.

A) példa

E példában az 1—93. példákban felsorolt (I) általános képletű vegyületek előállításához felhasznált kiindulási anyagok kialakítását ismertetjük. A kiindulási anyagok előállítását összefoglalóan táblázatos formában ismertetjük. Valamennyi kündulási anyagot arab számmal jelöltük meg, a megjelölt vegyületeket további kiindulási anyagok, illetve (I) általános képletű végtermékek előállításához használjuk fel.

A táblázatokban az egyes kiindulási anyagok képződéséhez vezető reakciókat betűjelzéssel és arab számmal jelöltük. A Hl—H13. módszer azonos az 1—42. példában, az El— E10. módszer azonos a 43—69. példában, az Fl—F3. módszer pedig azonos a 70—88. példában közöltekkel. A további módszereket a következőkben ismertetjük.

Aktív észter-reakciók:

Al. módszer: 1 mmól amino-vegyület és 1,1 mmól aktív észter minimális térfogatú dimetilformamiddal készített oldatát 20—25 °C-on tartjuk. Amikor a reakcióelegy ninhidrinnel már nem ad pozitív reakciót (15-50 óra elteltével), az elegyet vákuumban olyan térfogatra pároljuk be, amely a nyers termék elkülönítését lehetővé teszi. A nyers terméket szerves oldószeres kicsapással, vizes kezeléssel, vagy víz és egy megfelelő szerves oldószer (például éter) elegyével végzett kezeléssel különítjük el. Szükség esetén a nyers terméket a táblázatokban közölt módon tovább tisztítjuk.

A2. módszer: Az Al. módszer szerint járunk el, azonban reakcióközegként etilacetátot alkalmazunk, és a reakciót 4 °C-on végezzük.

A3, módszer: Az Al. módszer szerint járunk el, azonban az elegyhez körülbelül 0,2 mmól 1-hidroxi-benztriazolt adunk.

A4, módszer: Az Al. módszer szerint járunk el, azonban a reakciót 4 °C-on végezzük.

A5. módszer: Az Al. módszer szerint járunk el, azonban az elegyhez körülbelül 0,2 mmól 1-hidroxi-benztriazolt adunk, és az elegyet 4 °C-on tartjuk.

Vegyes anhidrid-reakciók:

Bl. módszer: 1 mmól karboxil-vegyület körülbelül 5 ml dimetilformamiddal készített oldatát —20 °C és -40 °C közötti hőmérsékletre hűtjük, és az elegyhez 1,05 mmól N-metil-morfolint, majd 1,05 mmól klórhangyasav-izobutilésztert adunk. Az elegyet 5 percig -20 °C és —40 °C közötti hőmérsékleten keverjük, majd az elegyhez 1 mmól amino-vegyület dimetflformamiddal készített oldatát adjuk. Ha az amino-vegyületet só formájában hasznújuk fel, a reakcióelegyhez 1 mmól N-metil-morfolint is adunk. Az elegyet a reakció teljessé válásáig (legföljebb 24 órán át) 20-25 °C-on keverjük, majd vákuumban bepároljuk. A maradékot híg, vizes citromsav és egy megfelelő, vízzel nem elegyedő szerves oldószer (rendszerint etilacetát) között megoszlatjuk. A szerves fázist elválasztjuk, egymás után híg, vizes citromsav-oldattal és vizes nátrium-hidrogénkarbonát-oldattal mossuk, végül szárítjuk, és az oldószert lepároljuk. Ha megfelelő szerves oldószer nincs, a

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

~5