176046. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 2,6-diszubsztituált-9-(ß-D-arabinofuranozil)-purin- 5'-foszfátok, gyógyászatilag elfogadható sóik és ilyen vegyületeket tartalmazó vírusellenes gyógyászati készítmények előállítására
5 176046 6 például karbodiimiddel, például karbodiciklohexilimiddel hajthatunk végre, kivéve, ha anhidrid formában van jelen. Valamely foszfonáttal bevitt alkoxi- vagy helyettesített alkoxicsoportok alkalmas vizes közegben, valamely bázis jelenlétében, egy további lépéssel hidrolizálhatók. A szubsztituált alkoxicsoportokat hidrogénezhetjük is, előnyösen egy katalizátor jelenlétében, például a benzilcsoportok lehasításánál általában alkalmazott módon. A találmány szerinti nukleozidok foszforozásának egy előnyös foganatosítási módja szerint úgy járunk el, hogy a nem védett nukleozidokat foszforilkloriddal (POCl5) reagáltatjuk trialkilfoszfát és előnyösen kis mennyiségű víz jelenlétében 0 °C vagy alacsonyabb hőmérsékleten. Ilyen feltételek mellett a foszforozás általában az 5'-helyzetben megy végbe. Először az 5'-foszfordikloridát keletkezik, amely enyhén lúgos körülmények között, vizes közegben készségesen hidrolizál a megfelelő foszfáttá. Egy az 5'-monofoszfátok előállítására alkalmas másik hasznos módszer szeiint a nem védett nukleozidot vízmentes piridinben foszforilkloriddal reagáltatjuk. Az eljárással általában 2'-, 3'- és 5'-foszfátok keverékét kapjuk, ahol az 5'-foszfát a domináns. Az 5'-foszfát elkülönítése és tisztítása szokásos kromatográfiás eljárásokkal történhet. A nem védett nukleozid ß,ß,ß-triklör-etilklórfoszfonáttal alacsony hőmérsékleten végrehajtott reakciója, majd a triklóretil-védőcsoport eltávolítása az 5'-helyzetben a cukor molekularészen, vizes piridinben cinkpor segítségével szintén a megfelelő 5'-nukleotid keletkezéséhez vezet. A találmány szerinti nukleotidok úgy is készülhetnek, hogy a 2- és 6-helyzetekben a purin szubsztituenseket enzimatikusan átalakítjuk. Vannak olyan ismert enzimek melyek egy a 2-helyzetben levő hidroxil- illetve aminocsoportnak kölcsönös egymásba alakulásához vezetnek. A fentiek értelmében a találmány az I általános képletű vegyületek — ahol R2 helyén aminocsoportot tartalmazó előnyös képviselőik előállítására vonatkozik. Az I általános képletű vegyületeket gyógyászati lag elfogadható hordozóanyagokkal összekeverve tartalmazó gyógyászati készítmények előállítása szintén a találmány tárgykörébe tartozik. A készítmények adagolása történhet orálisan, parenterálisan vagy helyilegattól függően, hogy a DNS (dezoxiribonukleinsav) vírusok okozta külső vagy belső fertőzésekről van-e szó. Előnyösen orálisan vagy oldat formájában (injekciós formában) használjuk a vegyületeket, amikor immun vagy autoimmún válaszról van szó. A DNS vírusok által emlős szervezetben okozott vírus fertőzések a találmány szerint előállított gyógyszerkészítményekkel úgy kezelhetők, hogy valamely I általános képletű vegyület — R2 a fenti jelentésű — előnyösen az R2 helyzetben aminocsoportot tartalmazó vegyület, vagy valamely gyógyászatilag elfogadható sójának hatásos, de nem toxikus mennyiségét juttatjuk a beteg szervezetébe. DNS vírusoknak azokat a vírusokat nevezzük, melyek DNS-t használnak építőelemként. Orális adagolás esetén a vegyületek finom por vagy granulátum formájához hígító, diszpergáló és/vagy felületaktív anyagokat is adhatunk, és maguk a készítmények vizes oldat, szirup, kapszula, száraz zacskók vagy nem-vizes szuszpenziók formájában szerelhetők ki, ahol az utóbbiak szuszpendáló szert is tartalmaznak. Ezen kívül készülhetnek tabletta formában is, amikor kötő- és kenőanyagok adagolására is szükség van, vagy vizes szuszpenzió vagy szirup formájában. Szükség esetén ízesítő, tartósító, szuszpendáló, sűrítő vagy emulgeáló szereket is adhatunk a készítményekhez. A legelőnyösebb kiszerelési formák a tabletták és granulátumok, melyek bevonatos formában is készülhetnek. Paienterális adagolás céljára a vegyületeket vizes injekciós oldatok formájában szerelhetjük ki, melyek tartalmazhatnak még antioxidáns szereket, puffereket és más adalékanyagokat. Találmányunk lényegét a következő példákkal szemléltetjük, anélkül, hogy találmányunkat a példákra korlátoznánk. 1. példa 2,6-Diamino-9-(ß-D-arabinofuranozil)-purin-5'-foszfát (Ara-DAPMP; I általános képletű vegyület, R2=NH2) 0,57 g vízmentes 2,6-diamino-9-(ß-D-arabinofuranozil)-purin 3,5 ml trietilfoszfáttal készült oldatát keverés közben —15 °C-ra hűtjük. 0,75 ml foszforoxikloridot adunk az oldathoz. —15 °C-on 1 órán át végzett keverés után további 2 ml trietilfoszfátot, majd 30 perccel később további 0,28 ml foszforoxikloridot adunk az elegyhez. A hűtőfürdőt a következő órában hagyjuk felmelegedni —2 °C-ra, és a reakcióelegyet ezen a hőmérsékleten tartjuk további 2,5 órán át. A reakcióelegyet szűrjük, hogy eltávolítsuk a nem reagált nukleozidokat (0,134 g). A szűrletet víz—jég elegyre öntjük és az elegy pH-értékét 7,8-ra állítjuk be 1 n nátriumhidroxid-oldat segítségével. Az oldatot kétszer extraháljuk kloroformmal, majd a vizes réteget 6 liter teljes térfogatra hígítjuk és a nukleozidokat Dowex 1—x8 ioncserélő gyantán adszorbeáljuk (klorid-forma). 12 g anyagot kapunk. A gyantát vízzel átmossuk, és a nukleotidot 1 mólos lítiumklorid-oldattal 6-os pH-értéken eluáljuk. Az eluátumot liofilizáljuk. A liofilizált porban levő Iítiumkloridot 9: 1 arányú aceton-metanol eleggyel extraháljuk. A maradékot feloldjuk vízben, szűrjük és a nukleotidot aktív faszénen adszorbeáljuk. Az ara-DAPMP-t az aktív szénről 10% ammónia — 50% etanol eleggyel eluáljuk. Az eluátum térfogatát csökkentett nyomáson, 40 °C-on körülbelül 60—70%-kaI csökkentjük, majd liofilizáljuk. 44 mg 2,6-diamino-9-(ß-D-arabinofuranozil)-purin-5'-foszfátot kapunk fehér, 300 °C felett olvadó por formájában, mely 190 °C-on megsötétedik. Ultraibolya spektruma 0,1 n sósav oldatban felvéve: XmOT 252 és 289 nm-nél és Xmjn 233 és 270 nm-nél, míg 0,1 n nátriumhidroxid-oldatban Xmax 254 és 278 nm-nél ésXn,;,, 236 és 265 nm-nél. 2. példa (Nem tartozik a találmány oltalmi körébe.) 2-Amino-6-hidroxi-9-(ß-D-arabinofuranoziI)-purin-5'-foszfát (Ara-GMP) 100 mmól, 5,9-es pH-értékű trisz-szukcinátot, 100 mmól káliumkloridot, 5 mmól ß-merkapto-etanolt, 8,6 mmól 2,6-diamino-9-(ß-D-arabinofuranozil)-purin-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
