175893. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új penám-3- karbonsav-származékok előállítására
27 175893 28 2. számú teszt (in vivo hatásosság) A 12. referencia példa szerint előállított A és C ampullák tartalmát ionmentes vízben feloldjuk és különböző koncentrációjú injekciós készítményeket állítunk elő. A D vegyületet ionmentes vízben oldjuk. Az A, B és C vegyületeket nátrium-karbonát (pH = 8—9) vizes oldatában oldjuk fel és különböző koncentrációkat kapunk. Az alább leírt körülmények között valamennyi injekciót beadjuk egereknek és a kapott ED5 0 közepes hatásos dózisokat a II. táblázat tartalmazza. Kísérleti körülmények: Egerek: 20 g súlyú ddY hím egerek Fertőzés: Staphylococcus aureus 50774 sz. Intravénás fertőzés 50—100 LD5o értékű sóoldatban levő b akté rium-szu szpenzió val (5x10® sejt/egér) Escherichia coli P—5101 Intraperitoneális fertőzés 50-100 LDso (9 x 10é sejt/egér) tryptosoy lé -4% mucint tartalmazó baktérium szuszpenzióval. Pseudomonas aeruginosa 12. sz. Intraperitoneális fertőzés 50-100 LDS0 5 x 10 (5 x 103 sejt/egér) tryptosoy fermentlé —4% mucint tartalmazó baktérium szuszpenzióval Gyógykétszer minden injekció kezelés: után 5 perccel és 6 órával Megfigyelés: Staphylococcus aureus 50774 sz. 14 nap Escherichia coli P— 5101 Pseudomonas aeruginosa 12 sz. 7 nap A II. táblázatból a következő következtetéseket lehet levonni. 1. Az 1. és 2. vegyületek in vivo kiváló antibakteriális hatást mutatnak. 2. Az 1. és 2. vegyületek különösen jól hatnak a Pseudomonas aeruginosa ellen és parenteiális adagolásnál 2-6 mg/kg az EDS0 értékük. 3. Az 1. és 2. vegyületek antibakteriális hatása parenterális adagolásnál Pseudomonas aeruginosa ellen mintegy 6—20-szor erősebb, mint az A. és B. vegyületek hatása, mely vegyületeket úgy kapunk a találmány szerinti vegyületekből, ha a 4-szubsztituált-l-piperazinilcsoport helyett az 1. és 2. vegyület piridopirimidin-csoportját a 2-es helyzetben 1-pirrolidinil- vagy dimetilaminocsoporttal helyettesítjük. 4. Az 1- és 2. vegyületek antibakteriális hatása Pseudomonas ellen parenterális adagolás esetén sokkal erősebb antibakteriális hatást mutatnak a C vegyülethez képest (pipemidinsav, különösen a Pseudomonas aeruginosa ellenes hatásáról ismert). 3. számú teszt (akut toxicitás) Az 1. és 2., valamint az A., B. és C. vegyületeket tartalmazó különböző koncentrációjú 2. számú teszt szerint kapott injekciós készítményeket ddY hím egereknek adtuk (csoportonként 4—8 egérnek) 0,1 ml/10 tsg. Az elhullt egerek számát 7 nap elmúltával megszámoltuk és kiszámítottuk az LD5o mg/kg közép letális dózist. Az eredményeket a III. táblázat tartalmazza. Kiszámítottuk a terápiás indexet, azaz az LDS0 és ED50 egymáshoz viszonyított arányát Pseudomonas aeruginosawal szemben és az értékeket a III. táblázatban tüntettük fel. III. táblázat Akut toxicitás egéren Vegyület Adagolás LD5 0 Kemoterápiás száma mód (mg/kg) index (LDso/EDso) 1. se >6000 >3000 iv 4518 1102 2. se >6000 >1200 iv 4518 753 A. se >1000 >26 iv > 1000-B. se 1072 33 C. se 2244 60 iv 707 17 Megjegyzés: az LD5 o értékeket a Behrens-Kaerber féle módszerrel számítottuk ki. A III. táblázatból a következő következtetéseket lehet levonni: 1. Az 1. és 2. vegyületek LDS0 értékei mintegy 4-10-szer nagyobbak, mint az A. és B. vegyületek LD50 értékei és ezért biztonságosak. 2. Az 1. és 2. vegyületek terápiás indexe 10-100-szor akkora, mint az A., B. és C. vegyületek terápiás indexe. Ez azt mutatja, hogy a találmány szerint előállított vegyületek kiváló antibakteriális hatást mutatnak Pseudomonas aeruginosa ellen. Az I—III. táblázatok szerint a találmány szerint előállított új penicillin-származékok széles spektrumú baktérium ellenes szerek, különböző Gram-pozitív és Gram-negatív baktériumok ellen hatásosak in vitro és in vivo tesztben egyaránt. Különösen parenterális adagolásnál Ampicillin rezisztens törzsek ellen hatnak, ugyanezen törzsek ellen az Amoxicillin hatástalan. Igen jó antibakteriális hatást mutatnak az új vegyületek a Pseudomonas genushoz tartozó baktériumok ellen, melyek ellen az Amoxicillin és sok más ismert antibiotikum hatástalan. A találmány szerint előállított sok penicillin-származék közül különösen az la képletű for-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 14
