175673. lajstromszámú szabadalom • Eljárás baktériumellenes diamino-ciklitol-származékok előállítására
15 175673 16 2. 2',3-Di(N-trifluoracetil)-gentamicin Cj A) 2'-N-trifluoracetil-gentamicin Ct 1.7 g gentamicin C,-et 20 ml metanolban feloldunk, a keveréket 4 C°-ra lehűtjük, és keverés közben 0,46 ml (0,563 g) etil-tiol-trifluoracetátot adunk hozzá. A keveréket 2 óráig reagál tatjuk, majd az oldatot vákuumban bepároljuk. A terméket 80 g szilikagél G oszlopon kromatografáljuk, eluálószerként kloroform—metanol— —víz—ammóniumhidroxid 10: 5 : 4: 1 térfogatarányú keverékének alsó fázisát használva. A főkomponenst tartalmazó frakciókat egyesítjük és koncentráljuk. 1,4 g címvegyületet kapunk. Op.= 108—111 C°, [a]2J= + 128° (c=0,3%, H20). B) 2',3-Di(N-trifluoracetil)-gentamicin C, Az A) lépésben kapott termék 0,66 g mennyiségét 10 ml metanolban feloldjuk, a keveréket 4 C°-ra lehűtjük, és 3 ml metanolban oldott 0,148 ml (0,182 g) etil-tiol-trifluoracetátot adunk hozzá. A reakciókeveréket kb. 16 órán át keverjük, és vákuumban bepároljuk. A terméket az a) lépés szerint 30 g szilikagélen kromatografáljuk. A kromatografálás eredményét vékonyrétegkromatogramon ellenőrizzük, a megfelelő frakciókat egyesítjük és koncentráljuk. 0,32 g címvegyületet kapunk . Op.= 121—129 C°, [afé=121° (c=0,3%, H20). 6. példa l-N-(S-4-Amino-hidroxi-butiril)-gentamicinCla A) l-N-(S-4-Benziloxikarbonilamino-2-hidroxi-butiril-gentamicin Cla 2.8 g (4 mmól) gentamicin Cla-szulfátot 30 ml vízben feloldunk, és az oldathoz 15 ml metanolt, majd 0,56 ml (4 mmól) trietilamint adunk, és az elegyet 10 percig keverjük. Az antibiotikum oldatához keverés közben cseppenként 20 ml száraz dimetilformamidban oldott 4 mmól N-(S-4-benziloxikarbonil-amino-2-hidroxibutiriloxij-szukcinimidet adunk. A reakciókeveréket éjszakán át (16 óra) szobahőmérsékleten keverjük, majd szilikagélen kromatografáljuk, eluálószerként kloroform—metanol—ammóniumhidroxid 1:1:1 oldószerrendszer alsó fázisát használva. A vékonyrétegkromatogram számos kisebb mennyiségben jelenlevő komponens és egy főkomponens jelenlétét mutatja. A reakciókeveréket vákuumban bepároljuk, és a maradékot metanollal eldörzsöljük. 3,2 g fehér szilárd terméket kapunk, amely az összes, előzőleg kromatográfiásan észlelt komponenst tartalmazza. 150 mg fenti terméket 50 g szilikagélen kromatografálunk, kloroform—metanol—ammóniumhidroxid 2:1:1 oldószerrendszer alsó fázisát használva. A főterméket tartalmazó frakciókat egyesítjük, és liofílizálva kapjuk az l-N-(S-4-benziloxikarbonil-amino-2-hidroxibut i ri l)-gentam icin-C ,a terméket. MMR spektrum (D20) (8-értékek ppm-ben): 1,15 3 H, s, C—CH3), 2,49 (3 H, s, NCH3), 4,10 (1 H, dd, J = 8,0,4,0 Hz, H—2 oldallánc), 7,36 (5 H, m, fenil). B) l-N-(S-4-Amino-2-hidroxi-butiril-gentamicin Cta Az A) lépésben előállított terméket 12 ml metanol és 3 ml víz keverékében feloldjuk, az oldathoz 20 mg 10%. os palládium/szén katalizátort adunk, és 4 atm nyomáson szobahőmérsékleten hidrogénezzük. 3 óra múlva a reakció lényegileg befejeződik, ekkor a katalizátort kiszűrjük, és a szűrletet liofilizáljuk. 46 mg l-N-(S-4- -amino-2-hidroxi-butiril)-gentamicin CIa terméket kapunk. MMR spektrum (D20) (8-értékek ppm-ben): 1,17 (3 H, s, C—CH3), 2,48 (3 H, s, NNC3), 4,22 (1 H, dd, J=9,5 Hz, 4,0 Hz, CHOH oldallánc), 5,04 (2H, m, H—1'ésH—1'). Tömegspektrum (M—H20) m/e 532. 7. példa l-N-(S-4-Amino-2-hidroxi-butiril)-gentamicin B AJ l-N-(S-4-Benziloxikarbonilamino-2-hidroxibutiril)-gentamicin B 3,39 g gentamicin B-szulfátot 48,4 ml vízben feloldunk, és az oldatot 23,7 ml metanollal hígítjuk. Az oldathoz keverés közben cseppenként 0,7 ml trietilamint adunk. 1,67 g N-(S-4-benziloxikarbonil-amino-2- -hidroxi-butiriIoxi)-szukcinimidet dimetilformamidban feloldunk, és ezt az oldatot cseppenként, keverés közben az antibiotikum oldatához adjuk. Az oldatot szobahőmérsékleten 18 órán át keverjük, majd vákuumban bepároljuk. A maradékot vízben oldjuk, és keverés közben hígított báriumhidroxid-oldattal kezeljük, amíg a pH-értéke 8,0 lesz. A kivált báriumszulfát csapadékot szűrősegédanyag segítségével kiszűrjük, a csapadékot vízzel mossuk, a szűrletet és a mosófolyadékokat egyesítjük, és vákuumban szárazra pároljuk. A maradékot 600 g szilikagélt tartalmazó oszlopon kromatografáljuk, eluálószerként kloroform—metanol—ammóniumhidroxid 1:1:1 oldószerrendszer alsó fázisát használva. Összegyűjtjük a közvetlenül a gentamicin B előtt eluált frakciókat, és ezeket szárazra párolva kapjuk az 1-N-(S-4-benziloxikarbonil-amino-2-hidroxibutiril)-gentamicin B-t amorf szilárd termék alakjában. A hozam 0,2 g. MMR spektrum (D2Ö) (8-értékek ppm-ben): 1,27 (3 H, s, C—CHj), 2,51 (3 H, s, NCH3), 5,08 (1 H, d, J=4 Hz), 5,25 (1 H, d, J=3 Hz). B) l-N-(S-4-Amino-2-hidroxibutiril>gentamicin B Az AJ lépésben kapott terméket 20 ml víz és 8 ml metanol keverékében feloldjuk. A terméket 60 mg 5%-® palládium/szén katalizátor jelenlétében 3,5 atm nyomáson és szobahőmérsékleten 3 órán át hidrogénezzük. A katalizátort szűrősegédanyag segítségével kiszűrjük. A szűrőlepényt vízzel mossuk, és a szűrletet és a mosófolyadékokat egyesítjük. Az egyesített szűrletet és mosófolyadékokat vákuumban szárazra pároljuk, és a maradékot 10 g szilikagélt tartalmazó oszlopon kromatografáljuk, eluálószerként kloroform—metanol—ammóniumhidroxid 1:2:1 oldószerrendszert használva. A te8- polárisabb komponenst tartalmazó frakciókat egy*5*1' jük, koncentráljuk és liofilizáljuk. így kapjuk az I-N-ÍS" -4-amino-2-hidroxibutiril)-gentamicin B terméket. A hozam 12 mg. A termék azonosítási adatait lásd a 2. W" dánál. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 8
