175673. lajstromszámú szabadalom • Eljárás baktériumellenes diamino-ciklitol-származékok előállítására
11 175673 12 termék 1,5 mmól mennyiségének 3 ml dimctilformamiddal készített oldatát. Az így kapott reakciókeveréket 18 órán át szobahőmérsékleten keverjük, majd vákuumban bepároljuk. A maradékot 10 ml tömény ammóniumhidroxid-oldatban feloldjuk, és 2 órán át állni hagyjuk a trifluoracetil-csoport eltávolítása céljából. Az oldószert eltávolítjuk, a maradék a címvegyület, ezt szilikagél oszlopon kromatografáljuk, eluáiószerként kloroform— —metanol—ammóniumhidroxid 2:1:1 oldószerrendszer alsó fázisát használva. A címvegyületet tartalmazó frakciókat összegyűjtjük és bepároljuk. A maradékot vízben feloldjuk, és liofilizáljuk, így fehér amorf szilárd terméket kapunk. A kapott l-N-(S-3-amino-2-hidroxi-propionil j-sziszomicin fizikai állandói : [<*]£= +139° (c=0,3, víz), PMR spektrum (100 MHz, DzO) 8-értékek ppm-ben: 1.22 (S), C—Me, 2,60 (S) N—Me 4,22 (Q), J=4 Hz, 7,5 Hz; 5,09 (d), Hr, J,„.2„=4,0 Hz; 5,34 (d), Hr, J,..r=2 Hz; Hasonló módon állítjuk elő a következő vegyületeket : l-N-(S-3-amino-2-hidroxi-propionil)-gentamicinCla PMR spektrum (100 MHz, D20) 8-értékek ppm-ben; 1.22 C—Me; 2,59 N—Me; 5,09 H—1", J1..r=4Hz, 5,17 H—1'. J|'.2>=3,5 Hz; [a]fj= +115,4° (c=0,3, víz); l-N-(S-3-amino-2-hidroxi-propionil)-gentamicin B PMR spektrum (100 MHz, D20+DC1) 8-értékek ppmben: 1,18 C—Me (S); 2,77 N—Me (S); 4,35 (Q), J=4,5, 8,0; H—1', 5,01 (d), Jr.2.=4,0 Hz; H—1", 5,43 (d), Jj».2»=3,5 Hz. 2. példa l-N-(S-4-Amino-2-hidroxi-butiril)-gentamicin B A) 6'-N-terc-Butoxikarbonil-gentamicin B 1 g gentamicin B-t 30 ml 50%-os vizes metanolban feloldunk, és az oldatot 5 C°-ra lehűtjük. Az oldathoz cseppenként keverés közben 0,297 g terc-butoxikarbonil-azidot, majd 0,186 ml trietilamint adunk, és az így kapott oldatot 18 órán át keverjük. A reakciókeveréket vákuumban bepároljuk, és a maradékot 100 g szilikagélcn kromatografáljuk, eluáiószerként kloroform—metanol—konc. ammóniumhidroxid 2:1:1 oldószerrendszer alsó fázisát használva. 2 ml-es frakciókat veszünk, és vékonyrétegkromatogramon ellenőrizzük. A megfelelő anyagot tartalmazó frakciókat (180—230.) egyesítjük és bepároljuk. 0,830 g 6'-N-terc-butoxikarbonil-gentamicin B-t kapunk, amelynek fizikai jellemzői a következők : PMR spektrum (60 MHz, D20) (8-értékek ppm-ben): 1,21 (3 H, s, C—CHj), 1,42 [9 H, s, C(CH3)3], 2,53 (3 H, s, N—CH3), 5,2 (1 H, d, J=4,5 Hz, H—1"), 5,23 (1 H,d, J = 3,0 Hz, H—1'). B) l-N-(S-4-Amino-2-hidroxi-butiriI)-6'-N-terc-butoxi-karbonil-gentamicin B 0,582 g 6'-N-terc-butoxikarbonil-gentamicin B-t metanol—víz 1 : 3 keverékének 25 ml-ében feloldunk. Ehhez az oldathoz 5 ml dimetilformamidban oldott 0,334 g N-(S-4-benziloxikarbonilamino-2-hidroxi-butiriloxi)-szukcinimidet csepegtetünk keverés közben. A reakcióelcgyct 5 órán át 5 C'-on keverjük, majd vákuumban szárazra pároljuk. A maradékot 60 g szilikagélen kromatografáljuk, eluáiószerként kloroform— —metanol—ammóniumhidroxid 2:1:1 oldószerrendszer alsó fázisát használva. 3 ml-es frakciókat viszünk, és ezek tartalmát vékonyrétegkromatográfiával ellenőrizzük. A 160—235. frakciókat egyesítjük, és 0,280 g súlyú maradékra bepároljuk, a maradék vékonyrétegkromatográfiával egységes foltot ad. A maradékot 8 ml metanol és 10 ml víz keverékében feloldjuk, és 60 mg 5%-os palládium/szén katalizátor jelenlétében 3,7 atm nyomáson hidrogénezzük. A katalizátort kiszűrjük, a szűrletet bepároljuk, és a maradékot 20 g szilikagélen kromatografáljuk, eluáiószerként kloroform—metanol—ammóniumhidroxid 1:1:1 oldószerrendszer alsó fázisát használva. A 2 ml-es frakciókból egyesítjük a 79—127. frakciókat, amelyek az l-N-(S-4-amino-2-hidroxi-butiril)-6'-N-terc-butoxikarbonil-gentamicin B terméket tartalmazzák. A hozam 86 mg. PMR spektrum (8-értékek ppm-ben): 1,21 (3 H, s, C—CH3), 1,43 [9 H, s, C—(CH3)3], 2,51 (3 H, s, N— —CHj), 5,08 (1 H, d, J=4 Hz, H—1"), 5,25 (1 H, d, J=3,5 Hz, H—1'). C) l-N-(S-4-Amino-2-hidroxibutiril)-gentamicin B AB) szerinti eljárásban kapott terméket 0,3 ml trifluorecetsavban feloldjuk, majd 5 perc múlva 30 ml etilétert adunk az oldathoz. Ekkor a címvegyület trifluorecetsavas sója válik ki, amelyet kiszűrünk. A csapadékot vízben feloldjuk, és az oldatot hidroxilion-alakban levő bázison ioncserélő gyantaoszlopon átfolyatjuk, és így a savaddíciós sót szabad bázissá alakítjuk. Az oszlopról távozó terméket liofilizálva a címvegyületet fehér amorf szilárd alakban kapjuk. A hozam 72 mg. PMR spektrum (D20, 100 MHz) 8-értékek ppm-ben: 1,14 C-metil (S), 2,45 (S) N-metil, 5,04 (d), H—1", Jr>2.=4,0 Hz; 5,30 (d), H—1', Jr,2.=3,5 Hz. 3. példa l-N-(S-3-Amino-2-hidroxi-propionil)-gentamicin Cj A) l-N-(S-3-Benziloxikarbonilamino-2-hidroxi-propionil)-2',3-di(N-trifluoracetil)-gentamicin Cj 0,84 g 2',3-di(N-trifluoracetil)-gentamicin C,-ct 40 ml tetrahidrofuránban feloldunk, és az oldathoz keverés közben hozzácsepegtetjük 1,19 g N-(S-3-benziloxikarbonilamino-2-hidroxi-propioniloxi)-szukcinimid 24 ml tetrahidrofuránnal készített oldatát. A reakcióelegyet 24 órán át keverjük, majd bepároljuk. A maradékot szilikagélen kromatografáljuk, eluáiószerként kloroform—metanol—konc. ammóniumhidroxid—víz 2: 1: 0,2: 0,8 (tf./tf.) oldószerrendszer alsó fázisát használva. A terméket vékonyrétegkromatogramon ellenőrizzük, és a célterméket tartalmazó frakciókat egyesítjük. A termék fizikai jellemzői a következők: op.= 125—131 C°, [<x]d = +93° (metanol). B) l-N-(S-3-Benziloxikarbonilamino-2-hidroxi-propionil)-gentamicin Ct 0,55 g A) lépés szerinti terméket 55 ml metanolban feloldunk, és az oldathoz keverés közben 25 ml tömény 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6
