175489. lajstromszámú szabadalom • Eljárás vakcinák előállítására
MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG SZABADALMI LEÍRÁS 175489 Nemzetközi osztályozás: Bejelentés napja: 1974. XI. 15. (LE—762) C 12 K 5/00, 9/00 Szovjetunió-beli elsőbbsége: 1973. XI. 16. (1 967 101) ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL Közzététel napja: 1980. II. 28. Megjelent: 1981. II. 28. I*;;, r. Feltalálók: Szabadalmas: Peraüze Tamaz Vlagyimirovics orvos, Fridman Eidlija Abramovna, orvos, Leningradskij Politehnicseszkij Insztyitut Zseieznova Nyina Vszevolodovna, mérnök, Kolikov Vszevolod Mihajiovics, imeni M.I. Kalinina, Leningrad, mérnök, Breszler Szemjon Hajmovics-Efimovics, vegyész, Mcsedlisvili Borisz Szovjetunió Viktorovics, mérnök, Molodkin Viktor Mihajiovics, mérnök, Molodkina Ljudmila Mihailovna, mérnök, Katuskina Nyina Vasziljevna, mérnök, Leningrad, Szovjetunió Eljárás vakcinák előállítására 1 A találmány tárgya eljárás nem allergén, elölt, önmagában ismert vírusokat tartalmazó, legfeljebb 0,1 mg/ml fehérjetartalmú vakcinák előállítására a kiindulási víruskultúra tisztítása, betöményítése, izolálása és inaktiválása útján. A találmány főként 5 a gyógyszeriparban alkalmazható poliomielitisz-, rabieszvírus, arbovirus, mixovirus alapú vakcinák előállítására vonatkozik, hogy csak néhány vírust említsünk, azonban alkalmazásával tetszés szerinti vírustenyészetből előállíthatok vakcinák. 10 A vakcinák előállítására irányuló eljárások egy része az ultracentrifugálás kihasználásán alapul (I. Virology, 1, 1207-1216 (1967)]. Az A2 Anglia 1/66, B/Románia 2/66, az Ann Arbor 1/57 törzsek vagy embertől izolált Au A2 15 vagy B típusú influenzavírus törzseket 10-11 napos embriók allantoisz üregében tenyésztik. A tenyésztés folyamán nyert 512—2048 hemagglutinációs egységű vírusaktivitású (a továbbiakban RHA egység, amely eritrociták hemagglutinációs reakció- 20 jával határozható meg) allantoisz-folyadékot centrifugálással (kis sebesség mellett, 15 perc, 1000 g) tisztítják. Ezután a folyadékot 60 perc/4000g sebességgel centrifugálják. Az összesített üledéket izotóniás foszfátpufferral hígítják és a kapott koncent- 25 rátumot káliumtartarát- és szacharóz-sűrűséggradiens beállításával preparatív centrifuga felhasználásával centrifugálják. A nyert frakciók legnagyobb vírustartalma átlagosan 5000 RHA-egység/mg fehérje. Ezt a szusz- 30 2 penziót izotóniás foszfátpufferrel hígítják oly módon, hogy a szuszpenzió 1000-2000 RHA-egységgel rendelkezzen. Ezt követően a vírusszuszpenziót 1 :2 arányban etiléter és Tween—80 beadagolásával inaktiválják. A kapott elegyet 0,45 /um pórusú cellofánmembránon át szűrik és sterilizálják, majd a vakcinákat elkülönítik. Az ultracentrifugáláson alapuló eljárások közül ismert egy további eljárás. Lényege, hogy az allantiosz-folyadékot (pH 7,8—9) 0,16 mól nátriumoxaláttal és száraz báriumszulfáttal, melyet 40-60 g/liter allantiosz-folyadék mennyiségben vesznek, 0-3 °C hőmérsékleten összekeverik. A szuszpenziót 90 percig keverik és egy éjszakán át állni hagyják. Ezután a báriumszulfátot, amelyen a vírusok adszorbeáltak, 7000 U/perc forgásszámú átömlőkerékben 50—80 liter/óra áramlási sebességgel centrifugálva leválasztják. Az eluálást a kiindulási térfogat 1/7-ének megfelelő mennyiségű eluáló folyadékkal végzik, amely 0,2 súly% zselatint, 0,25 mól citromsavat, 1,0 mól nátriumkloridot, 0,4 mól trisz-(trioximetilamino)-metánt és 0,16 mól Tween-80-at (pH 7,2) tartalmaz. Az eluálást követő nap a báriumszulfátot 10 perc/800 g sebességgel centrifugálással szobahőmérsékleten leválasztják. A kapott eluátum pH-ját 8-ra beállítják és pirogénmentes vízzel hígítják. Ezt követően a hígított eluátumot centrifugálják, majd Sephadex G—25 szűrőn gélkromatografálják és azután ismét szacharóz-gradiens beállításával centri-174480
