175306. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új polipeptidek előállítására
61 175306 62 számított: C -50,47%, H =6,35%, N = 18,73%, talált: C -50,12%, H =6,51%, N = 18,73%. b) Z-7-Abu-Arg(N02 )-Gly-OH előállítása. 20 ml acetonban feloldunk az a) lépésben kapott vegyületből 2,0 g-ot, majd a kapott oldathoz jeges hűtés közben 5,7 ml 1 normál vizes nátrium-hidroxid-oldatot adunk. A keveréket ezután szobahőmérsékleten 2 órán át keverjük, majd 6 ml 1 normál sósavoldatot adunk hozzá. Az acetont ezután csökkentett nyomáson ledesztilláljuk, majd a kivált kristályokat kiszűrjük, ezt követően pedig etanol és víz elegyéből átkristályosítjuk. így 1,86 g (98%) mennyiségben a 113-115 °C olvadáspontú cím szerinti vegyületet kapjuk, amelynek fajlagos forgatóképessége [“jp1 =-20,0° (c = 1,1, dimetil-formamidban). Elemzési eredmények a C20H29O8N7-HíO képlet alapján: számított: C =46,78%, H =6,09%, N = 19,10%, talált: C =57,12%, H =5,90%, N = 19,23%. c) Z-7—Abu-Arg(N02 )—Gly—Phe—Phe— -Tyr—NH2 előállítása 1,34 g Z-Phe—Phe—Tyr-NH2-hoz kis mennyiségű anizolt, majd 13 ml 25%-os ecetsavas hidrogén-bromid-oldatot adunk. A kapott keveréket szobahőmérsékleten 45 percen át rázzuk, majd dietilétert adunk hozzá, és a kivált csapadékot kiszűrjük, majd szemcsés nátrium-hidroxid felett szárítjuk. Ugyanekkor 5 ml dimetil-formamidban feloldunk 0,99 g Z—7—Abu—Arg(N02 )—Gly—OH-t és 0,43 g HONB-t, majd a kapott oldathoz jeges hűtés közben 0,50 g DCC-t adunk. A kapott keveréket 6 órán át keverjük, majd a kivált diciklohexil-karbamidot kiszűrjük. A fenti aminokomponenst 10 ml dimetil-formamidban feloldjuk, majd a kapott oldatot trietil-aminnal semlegesítjük. Az oldathoz ezután hozzáadjuk a fenti reakcióképes észter oldatát, majd a reakcióelegyet egy éjszakán át keverjük. Az oldószert ezután csökkentett nyomáson ledesztilláljuk, majd a maradékhoz vizet adunk. A kivált port kiszűrjük, etil-acetáttal mossuk, végül pedig dimetil-formamid és etil-acetát elegyéből átcsapjuk. így 1,12 g (58%) mennyiségben a 139,5—141 C olvadáspontú cím szerinti vegyületet kapjuk, amelynek fajlagos forgatóképessége Md* =-13,2° (c = 1,4, dimetil-formamidban). Elemzési eredmények a C47H5 7O11 Ni 1-H2 O képlet alapján: számított: C =58,19%, H =6,13'%, N = 15,89%, talált: c =57,76%, H =6,43%, N = 15,91%. d) H—7—Abu—Arg-Gly—Phe-Phe—Tyr—NH2 előállítása 30 ml ecetsavban feloldunk a c) lépésben kapott vegyületből 800 mg-ot, majd a kapott oldaton katalizátorként palládiumkormot használva 14 órán át hidrogéngázt vezetünk keresztül. A katalizátort ezután kiszűrjük, majd a szűrletet csökkentett nyomáson bepároljuk és a maradékot felvisszük egy l,5cm-szer 10cm méretű, karboximetil-sephadex gyantából készült oszlopra. Az oszlopot 700 ml 0,1 normál és 700 ml 1 normál vizes ammónium-acetát-oldattal lineáris gradiens-eluálásnak vetjük alá. A 410 ml és 600 ml közötti frakciókat összeöntjük, majd liofilizáljuk. így 412 mg (52%) mennyiségben a cím szerinti vegyületet kapjuk, amelynek fajlagos forgatóképessége [<*Jq2 =-18,1° (c = 0,5, vízben). Elemzési eredmények a C^E^ChNio’ •2C2H4O2 • 4H20 képlet alapján: számított: C =54,02%, H =7,10%, N = 14,52%, talált: C =54,08%, H =7,07%, N = 14,60%. Aminosav-elemzés : Arg: 0,96 (1), Gly: 1,00 (1), Tyr: 0,97 (1), Phe: 2,10 (2), peptidtartalom 84%. 39. példa H-e-Acap-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-NH2 előállítása a) Z—e- Acap-Arg(N02 )-Gly—OEt előállítása 2,41 g Z-Arg(N02 )-Gly-OEt-hez 12 ml 25%-os ecetsavas hidrogén-bromid-oldatot adunk, majd a kapott keveréket szobahőmérsékleten 40 percen át rázzuk, ezután pedig dietilétert adunk hozzá. A képződött csapadékot kiszűrjük, majd szemcsés nátrium-hidroxid felett szárítjuk. Ugyanekkor 5 ml tetrahidrofuránban feloldunk 1,33 g Z—e—Acap—OH-t és 0,99 g HONB-t, majd a kapott oldathoz jeges hűtés közben 1,14 g DCC-t adunk. A keveréket ezután 4 órán át keverjük, majd a kivált diciklohexil-karbamidot kiszűrjük. Az előző bekezdésben előállított aminkomponenst 10 ml dimetil-formamidban feloldjuk, majd az oldatot trietil-aminnal semlegesítjük és ezután hozzáadjuk a reakcióképes észter tetrahidrofurános oldatát. A reakcióelegyet ezután egy éjszakán át keverjük, majd csökkentett nyomáson bepároljuk és a maradékot 50 ml etil-acetátban feloldjuk. Az oldatot vízzel, majd kétszer 50 ml telített vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, ezután pedig ismét vízzel mossuk, ezt követően pedig vízmentes nátrium-karbonát felett szárítjuk. Az oldatot ezután csökkentett nyomáson bepároljuk, majd a maradékhoz petrolétert adunk. A kivált kristályokat kiszűrésük után víz, etanol és etil-acetát elegyéből átkristályosítjuk. így 2,1 g (76%) mennyiségben a 85-87 °C olvadáspontú cím szerinti vegyületet 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 31
