175306. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új polipeptidek előállítására

45

175306

46

mennyiségben a 181—184 °C olvadáspontú cím szerinti vegyületet kapjuk, amelynek fajlagos forgatóképessége [a]?,4 = -16,0° (c = 1,01, dimetil-formamidban).

Elemzési eredmények a C43H5o01oN1o'H2C képlet alapján:

számított: C =58,35%, H =5,92%,

N =15,83%,

talált: C =58,02%, H =5,98%,

N = 15,66%.

b) H—Arg—Gly—Phe—Phe—Tyr—NH2 -diacetát előállítása

30 ml ecetsavban feloldunk az a) lépésben kapott vegyületből 600 mg-ot, majd a kapott oldaton katalizátorként palládiumkormot használva 9 órán át hidrogéngázt vezetünk keresztül. A katalizátort ezután kiszűrjük, majd a szűrletet csökkentett nyomáson bepároljuk. A maradékot 15 ml vízben feloldjuk, majd a vizes oldatot felvisszük egy 1,3 cmszer 11 cm méretű, karboximetil-Sephadex márkanevű gyantából készült oszlopra. Az oszlopot 500 ml 0,1 mólos és 500 ml 1 mólos vizes ammónium-acetát-oldattal lineáris gradiens-eluálásnak vetjük alá. A 250 ml és 420 ml közötti frakciókat összeöntjük, majd liofilizáljuk. így 416 mg (72,5%) mennyiségben a cím szerinti vegyületet kapjuk, amelynek fajlagos forgatóképessége [a]pS = -7,6° (c = 0,49, vízben).

Elemzési eredmények a C35H47O6N9 • •2C2H402 • 2H20 képlet alapján:

számított: C = 55,37%, H = 7,03%,

N = 14,90%,

talált: C =55,81%, H =6,83%,

N = 14,78%.

Aminosa v-elemzé s :

Arg: 1,02, Gly: 1,00, Tyr: 0,91,

Phe: 2,02 (peptidtartalom 82,5%);

c) Z-Leu-Arg(N02)-Gly—Phe-Phe-Tyr-NH2 előállítása

A b) lépésben kapott vegyületből 700 mg-hoz 0,2 ml anizolt, majd 7 ml 25%-os ecetsavas hidrogén-bromid-oldatot adunk. A kapott keveréket szobahőmérsékleten 40 percen át rázzuk, majd 100 ml dietilétert adunk hozzá. A képződött kristályokat kiszűrjük, szárítjuk és 10 ml dimetil-formamidban feloldjuk. Miután az oldatot trietil-aminnal semlegesítettük, 344 mg Z-Leu-Osu-t adunk hozzá. A reakcióelegyet ezt követően 12 órán át keverjük, majd a dimetil-formamidot csökkentett nyomáson ledesztilláljuk, és a maradékhoz 50 ml vizet adunk. A kivált port kiszűrjük, majd metanol és víz elegyéből végzett átcsapás útján tisztítjuk. így 560 mg (70,9%) mennyiségben a 193—195 °C olvadáspontú cím szerinti vegyületet kapjuk, amelynek fajlagos forgatóképessége [a]i,2 =-18,9° (c=l,13, dimetil-formamidban).

Elemzési eredmények aC49H6i0i iN! ( • H20 képlet alapján

számított: C =58,96%, H =6,36%,

N = 15,44%,

talált: C = 58,72%, H =6,22%,

N = 15,36%.

d) H-Leu—Arg—Gly—Phe—Phe—Tyr—NH2 előállítása

30 ml ecetsavban feloldunk a c) lépésben kapott vegyületből 400 mg-ot, majd a kapott oldaton katalizátorként palládiumkormot használva 10 órán át hidrogéngázt vezetünk keresztül. A katalizátort ezután kiszűrjük, majd a szűrletet csökkentett nyomáson bepároljuk. A maradékot 5 ml vízben feloldjuk, majd a vizes oldatot felvisszük egy 2,6 cm-.szer 22 cm méretű, karboximetil-cellulózból készült oszlopra. Az oszlopot 700 ml 0,005 mólos és 700 ml 0,2 mólos vizes ammónium-acetát-oldattal gradiens-eluálásnak vetjük alá. A 830 ml és 910 ml közötti frakciókat összeöntjük, majd liofilizáljuk. így 217 mg (55,5%) mennyiségben a cím szerinti vegyületet kapjuk, amelynek fajlagos forgatóképessége [“Id' = -14,9° (c = 0,47, vízben).

Elemzési eredmények a C4iH5607Ni0'

• 2C2H402’ 3H20 képlet alapján:

számított: C = 55,43%, H =7,24%,

N = 14,37%,

talált: C =55,71%, H =7,12%,

N = 14,81%.

Aminosav-elemzés :

Arg: 1,03, Gly: 1,00, Leu: 1,00,

Phe: 2,00, Tyr: 0,85 (peptidtartalom 78%).

27. példa

H-a-Abu-Arg-Gly-Phe—Phe-Tyr-NH2 előállítása

A 26. példában ismertetett módon járunk el azzal a különbséggel, hogy Z—Leu helyett Z—a— -Abu-t használunk. így a cím szerinti vegyületet kapjuk, amelynek fajlagos forgatóképessége Mp2 (c = 0,32, vízben).

Aminosav-elemzés :

Arg: 1,02, Gly: 0,98, a-Abu: 1,04,

Phe: 2,00, Tyr: 0,92,

(peptidtartalom 81%).

28. példa

H-Nle-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr—NH2 előállítása

A 26. példában ismertetett módon járunk el azzal a különbséggel, hogy Z-Leu helyett Z-Nle-t használunk. így a cím szerinti vegyületet kapjuk, amelynek fajlagos forgatóképessége [úc]d* = -14,3° (c = 0,4, vízben).

Aminosav-elemzés :

Arg: 1,00, Gly: 0,97, Nie: 1,04,

Phe: 2,03, Tyr: 0,91 (peptidtartalom 84%).

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

23