175306. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új polipeptidek előállítására
35 175306 36 H-e-Acap-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-Thr-Pro-OH előállítása a) Z-e-Acap-Arg(N02)-Gly—OEt előállítása. 2,41g Z—Arg(NOj )—Gly—OEt-hez 12 ml 25%-os ecetsavas hidrogén-bromid-oldatot adunk, majd a kapott keveréket szobahőmérsékleten 40 percen át rázzuk. Az így képződött oldathoz ezután dietilétert adunk, majd a kivált csapadékot kiszűrjük és szemcsés nátrium-hidroxid felett szárítjuk. Ugyanekkor 5 ml tetrahidrofuránban feloldunk 1,33 g Z-e-Acap-OH-t, és 0,99 g HONB-t, majd a kapott oldathoz jeges hűtés közben 1,14 g DCC-t adunk. A kapott oldatot 4 órán át keveijük, majd a kivált diciklohexil-karbamidot kiszűrjük. Az előző bekezdésben kapott amint feloldjuk 10 ml dimetil-formamidban, majd az így kapott oldatot trietil-aminnal semlegesítjük és hozzáadjuk az ebben a bekezdésben ismertetett módon előállított reakcióképes észter oldatát. A reakcióelegyet ezután 1 éjszakán át keverjük, majd az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk és a maradékot 50 ml etil-acetátban feloldjuk. Az így kapott oldatot először vízzel, majd kétszer 50 ml telített vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal mossuk. Ezután újra vízzel mossuk, majd pedig vízmentes nátrium-szulfát felett szárítjuk. Ezt követően az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk, majd a maradékhoz petrolétert adunk. A képződött kristályokat kiszűrésük után víz, etanol és etil-acetát elegyéből átkristályosítjuk, így 2,1 g (76%) mennyiségben a 85-87 °C olvadáspontú cím szerinti vegyületet kapjuk, amelynek fajlagos forgatóképessége [a]o4=-ll,9° (c = 1, dimetil-formamidb an). Elemzési eredmények a C'4Hj708N7 képlet alapján: számított: C =52,26%, H =6,76%, N = 17,78%, talált: C =52,43%, H =6,64%, N = 17,76%. b) Z-e- Acap-Arg(N02 )-Gly-OH előállítása 10 10 ml acetónban feloldunk az a) lépésben kapott vegyületből l,8g-ot, majd a kapott oldathoz jeges hűtés közben 2,9 ml 2 normál nátrium-hidroxid-oldatot adunk. A reakcióelegyet ezután szobahőmérsékleten 2 órán át keverjük, majd 2,5 ml 1 normál sósavoldatot adunk hozzá és az acetont ledesztilláljuk. A maradékhoz 10 ml vizet adunk, majd a vizes oldatból az oldhatatlan részt kiszűrjük és a szűrletet 1 normál sósavoldattal megsavanyítjuk. A kivált kristályokat végül kiszűrjük. így 1,59 g (93%) mennyiségben a 97,5-99 °C olvadáspontű cím szerinti vegyületet kapjuk, amelynek fajlagos forgatóképessége [a]^4 = -10,7° (c=l, dimetil-formamidban). Elemzési eredmények a C2 2Hj jOgN7 *H20 képlet alapján: 18. példa számított: C = 48,79%, H - 6,52%, N = 18,10%, talált: C =48,50%, H =6,28%, N = 18,23%. c) H-e-Acap-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-Thr-Pro—OH előállítása A 17. példa b) lépésében ismertetett módon járunk el azzal a különbséggel, hogy Z~0-Ala-Arg(NOj)-Gly-OH helyett Z-e- Acap-Arg(NOj )—Gly-OH-t használunk, majd a 19. példa c) lépését elvégezzük, amikor is 428 mg mennyiségben a cím szerinti vegyületet kapjuk, amelynek fajlagos forgatóképessége [a]p4 = -37,9° (c = 0,25, vízben). Aminosav-elemzés : Arg: 1,02, Thr: 1,02, Pro: 1,00, Gly: 1,01, Phe: 2,04, Tyr: 0,92, e-Acap: nem meghatározott (peptidtartalom 84,9%). 19. példa H-Lys-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-Thr-Pro-OH előállítása a) Di-Z-Lys-Arg(N02)-Gly-OEt előállítása 2,07 g di—Z—Lys—OH-ból kiindulva a cím szerinti vegyületet a 18. példa a) lépésében ismertetett módon állítjuk elő. A kapott gélt víz, etanol és etil-acetát elegyéből átcsapjuk. így 2,57 g (73%) mennyiségben a 161—162 °C olvadáspontú cím szerinti vegyületet kapjuk, amelynek fajlagos forgatóképessége [a]^4 = -11,9° (c = 1, dimetil-formamidban). Elemzési eredmények a C32H4 4 0ioN8 képlet alapján: számított: C =54,85%, H =6,33%, N = 15,99%, talált: C =54,45%, H =6,05%, N = 15,99%. b) Di—Z—Lys—Arg(N02 )—Gly—OH előállítása 10 ml acetonban feloldunk az a) lépésben kapott vegyületből 2,0g-ot, majd a kapott oldathoz jeges hűtés közben 2,1 ml 2 normál nátrium-hidroxid-oldatot adunk. A reakcióelegyet ezután szobahőmérsékleten 2 órán át keverjük, majd 1,4 ml 1 normál sósavoldatot adunk hozzá, az acetont csökkentett nyomáson ledesztilláljuk és a maradékhoz 10 ml vizet adunk. A vizes oldatból az oldhatatlan részt kiszűrjük, majd a szűrletet 1 normál sósavoldattal megsavanyítjuk. A képződött gélt kiszűrjük. így 1,78 g (93%) mennyiségben a 131-132,5 °C olvadáspontú cím szerinti vegyületet kapjuk, amelynek fajlagos forgatóképessége [a]^4 = -10,5° (c=l, dimetil-formamidban). 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 18
