175306. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új polipeptidek előállítására
37 175306 38 Elemzési eredmények a C3oH4oOi0N8-1,5^0 képlet alapján: számított: C -51,49%, H =6,20%, N = 16,02%, talált: C =51,43%, H =5,92%, N =16,23%. c) H-Lys-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-Thr-Pro-OH előállítása Elemzési eredmények a C26H41O7N3 képlet alapján: számított: C =61,52%, H =8,14%, 5 N =8,28%, talált: C =61,61%, H =8,10%, N =8,18%. b) Z-Pro—Lys(BOQ—Alá—OtBu 10 előállítása A 17. példa b) lépésében ismertetett módon járunk el azzal a különbséggel, hogy Z-0-Ala-Arg(NOí )-Gly-OH helyett kiindulási anyagként di-Z-Lys-Arg(NOj )—Gly—OH-t használunk. így 15 452 mg mennyiségben a cím szerinti vegyületet kapjuk, amelynek fajlagos forgatóképessége Md = -34>8° (c = °>4> vízben). Aminosav-elemzés : Lys: 1,08, Arg: 1,01, Thr: 0,92, Pro: 1,00, 20 Gly: 1,00, Phe: 2,08, Tyr: 0,89 (peptidtartalom 85,2%). 20. példa 25 H-ß-Ala—Arg—Gly—Phe—Phe—Tyr—Thr—Pro— -Lys-Ala-OH előállítása a) Z-Lys(BOC)—Alá—OtBu 30 előállítása 300 ml metanolban feloldunk 14 g Z—Ala— -OtBu-t, majd a kapott oldaton katalizátorként palládiumkormot használva 2 órán át hidrogéngázt 35 vezetünk keresztül. Ezt követően a katalizátort kiszűrjük, majd a szűrletből a metanolt ledesztilláljuk. A maradékot 50 ml tetrahidrofuránban feloldjuk. Ezzel egyidejűleg 300 ml etil-acetátban 28,1 g 40 Z -Lys(BOC)—OH-diciklohexilaminsót szuszpendálunk, majd a szuszpenziót háromszor 200 ml 0,5 normál kénsavoldattal mossuk. Vizes mosás után a szuszpenziót vízmentes nátrium-szulfát felett szárítjuk. Ezt követően az etil-acetátot részben 45 ledesztilláljuk úgy, hogy a szuszpenzió térfogata mintegy 150 ml maradjon. Ezt a szuszpenziót azután hozzáadjuk a fentiekben ismertetett módon előállított tetrahidrofurános oldathoz, majd a kapott elegyhez 10 g HONB-t adunk. A reakcióele- 50 gyet ezután jeges fürdőben lehűtjük, majd 11,3 g DCC-t adunk hozzá és 16 órán át keverjük. Ezután a kivált diciklo-hexil-karbamidot kiszűrjük, majd a szűrletet szárazra pároljuk. A maradékot feloldjuk 500 ml etil-acetátban, majd az így kapott oldatot 55 0,5 normál kénsavoldattal, 4%-os vizes nátrium-hidmgén-karbonát-oldattal, végül pedig vízzel mossuk, vízmentes nátrium-szulfát felett szárítjuk és csökkentett nyomáson bepároljuk. A maradékhoz petrolétert adunk, amikor is kristályok válnak ki. A 60 kristályokat kiszűrjük, majd etil-acetát és petroléter begyéből átkristályosítjuk. így 21,9 g (87%) mennyiségben az 55—57 °C olvadáspontú cím szennti vegyületet kapjuk, amelynek fajlagos forgató- Kepessége [a&3 =-30,17° (c = 1,16, metanolban). 65 40 ml metanolban feloldunk az a) lépésben kapott vegyületből 2,5 g-ot, majd a kapott oldaton katalizátorként palládiumkormot használva 2 órán át hidrogéngázt vezetünk keresztül. Ezután a katalizátort kiszűrjük, majd a szűrletet csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A kapott maradékot 20 ml etil-acetátban feloldjuk, majd ehhez az oldathoz 2,45 g Z-Pro-ONB-t adunk és az így kapott elegyet szobahőmérsékleten 18 órán át keverjük. Ezután az oldathoz 200 ml etil-acetátot adunk, majd az elegyet 0,5 normál kénsavoldattal, 4%-os vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, ezt követően pedig háromszor vízzel mossuk, vízmentes nátrium-szulfát felett szárítjuk és csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A maradékhoz petrolétert adunk, majd a kivált kristályokat kiszűrjük, ezután pedig etil-acetát és petroléter elegyéből átkristályosítjuk. így 2,53 g (85%) mennyiségben a 127— -129 °C olvadáspontú cím szerinti vegyületet kapjuk, amelynek fajlagos forgatóképessége [“Id3 = -64,52° (c= 1,04, metanolban). Elemzési eredmények a C3iH4s08N4 képlet alapján: számított: C =61,57%, H =8,00%, N = 9,27%, talált: C =61,81%, H =8,31%, N = 9,37%. c) Z—Thr—Pro—Lys(BOC)—Alá—OtBu előállítása 40 ml metanolban feloldunk a b) lépésben kapott vegyületből 2,12 g-ot, majd a kapott oldaton katalizátorként palládiumkormot használva 3 órán át hidrogéngázt vezetünk keresztül. A katalizátort ezután kiszűrjük, majd a szűrletet csökkentett nyomáson bepároljuk. A maradékot 20 ml dioxánban feloldjuk. Ezzel egyidejűleg 977 mg Z-Thr—OH és 806 mg HONB keverékét feloldjuk etil-acetát és dioxán 1 :1 arányú elegyéből 10ml-ben, majd a kapott oldathoz jeges hűtés közben 800 mg DCC-t adunk. A reakcióelegyet ezután 6 órán át keverjük, majd a képződött diciklohexil-karbamidot kiszűrjük és a szűrletet hozzáadjuk az előző bekezdésben előállított dioxános oldathoz. A kapott elegyet ezután 16 órán át keverjük, majd az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk és a maradékot 150 ml etil-acetátban feloldjuk. Az így kapott oldatot 0,5 normál kénsavval, 4%-os vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, ezt követően pedig vízzel mossuk, vízmentes nátrium-szulfát felett szárítjuk és az oldószert csökkentett nyomáson le desztilláljuk. A 19
