175306. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új polipeptidek előállítására
33 175306 34 tort kiszűrjük, majd a szűrletet csökkentett nyomáson bepároljuk. A maradékot 5 ml vízben feloldjuk, majd a vizes oldatot felvisszük egy 2,6 cm-szer 18 cm méretű, karboximetil-cellulózból készült oszlopra. Az oszlopot ezután 700 ml 0,005 mólos és 700 ml 0,2 mólos vizes ammónium-acetát-oldattal gradiens-eluálásnak vetjük alá. A 370 ml és 720 ml közötti frakciókat összeöntjük, majd liofilizáljuk. így 277 mg (64,2%) mennyiségben a cím szerinti vegyületet kapjuk, amelynek fajlagos forgatóképessége [<*]p3 =—32,5° (c = 0,51, vízben). Elemzési eredmények a C44H60O9N10 ‘CîmOî ‘3^0 képlet alapján: számított: C = 55,97%, H =7,15%, N = 14,19%, talált: C =55,80%, H =7,20%, N = 14,17%. Amin osa v-el emzés : Arg: 1,00, Gly: 1,04, Leu: 1,08, Phe: 2,16, Tyr: 0,88, 0-Ala: 1,04, (peptidtartalom 85,9%). 17. példa H—ß—Ala—Arg—Gly-Phe-Phe—Tyr—Thr—Pro—OH előállítása a) Z—Phe—Phe—Tyr-Thr—Pro—OtBu előállítása 30 ml metanolban feloldunk 1,80 g Z—Thr—Pro-OtBu-t, majd a kapott oldaton katalizátorként palládiumkormot használva 5 órán át hidrogéngázt vezetünk keresztül. Ezután a katalizátort kiszűrjük, majd a szűrletet csökkentett nyomáson bepároljuk. A maradékot 20 ml dimetil-formamidban feloldjuk, majd az oldatot —10 °C-ra lehűtjük, ezután pedig 2,70 g Z-Phe-Phe-Tyr-OH-t, 1,59 g HONB-t és ! .37 g DCC-t adunk hozzá. A kapott reakcióelegyet ezután 18 órán át keveijük, majd a képződött diciklohexil-karbamidot kiszűrjük és a szűrlethez 100 ml vizet adunk. A képződött csapadékot kiszűrjük, szárítjuk és 100 ml etil-acetátban feloldjuk. Az oldatot kétszer 50 ml vízzel mossuk, majd vízmentes nátrium-szulfát felett szárítjuk. Az oldószert ezután ledesztilláljuk, majd a maradékhoz etil-acetátot adunk. A képződött port kiszűrjük és szárítjuk. így 2,51 g (89,8%) mennyiségben a 137-139 °C olvadáspontú cím szerinti vegyületet kapjuk, melynek fajlagos forgatóképessége [a]í)S = —44,1° (c= 1,08, dimetil-formamidban). Elemzési eredmények a C48H57O10N5 'H20 képlet alapján: számított: C =65,36%, H =6,74%, N = 7,94%, ^ált: C =65,49%, H =6,82%, N = 7,91%. b) Z-/3—Alá—Arg(NO, )-Gly-Phe-Phe-Tyr-Thr-Pro-OtBu előállítása. 20 20 ml metanolban feloldunk az a) lépésben kapott vegyületből 1,50 g-ot, majd a kapott oldaton katalizátorként palládiumkormot használva hidrogéngázt vezetünk keresztül 4 órán át. A katalizátort ezután kiszűrjük, majd a szűrletet csökkentett nyomáson bepároljuk. A maradékot 10 ml dimetil-formamidban feloldjuk, majd az így kapott oldathoz jeges hűtés közben 0,87 g Z—0—Ala-Arg(N02 )—Gly—OH-t, 0,47 g HONB-t és 0,54 g DCC-t adunk. A kapott reakcióelegyet ezután 16 órán át keverjük, majd a kivált diciklohexil-karbamidot kiszűrjük és a szűrlethez 50 ml vizet adunk, amikor is gél válik ki. Ezt a csapadékot kiszűrjük, szárítjuk, ezután pedig dimetil-formamid és etil-acetát elegyéből átcsapjuk. A csapadékot kiszűrjük, majd etanolból újból átcsapjuk. így 1,40 g (67,4%) mennyiségben a 153—156 °C olvadáspontú cím szerinti vegyületet kapjuk, amelynek fajlagos forgatóképessége [“jp5 = -32,3° (c = 0,97, dimetil-formamidban). Elemzési eredmények a Cs9H7 60]5Nj2 képlet alapján: számított: C =58,50%, H =6,57%, N = 13,88%, talált: C =58,24%, H =6,54%, N = 13,87%. c) H—0—Ala—Arg—Gly—Phe—Phe—Tyr—Thr— —Pro—OH előállítása A b) lépésben kapott vegyületből 900 mg-hoz 0,9 ml anizolt, majd pedig 10 ml vízmentes hidrogén-fluoridot adunk. A kapott keveréket —4 °C-on 30 percen át keverjük, majd pedig a hidrogén-fluoridot csökkentett nyomáson iedesztilláljuk és a maradékhoz 30 ml vizet adunk. Az így kapott oldatot 30 ml dietiléterrel extraháljuk, majd a vizes fázist felvisszük egy 1,0 cm-szer 10 cm méretű, Amberlite IRA—410 márkanevű gyantából (acetát formájú) készült oszlopra, az oszlopot pedig vízzel eluáljuk, illetve mossuk. Az eluátumot és a vizes mosófolyadékot összeöntjük, majd liofilizáljuk. A liofilizátumot 10 ml vízben feloldjuk, majd a vizes oldatot felvisszük egy 2,2 cm-szer 21 cm méretű, karboximetil-cellulózból készült oszlopra. Az oszlopot 700 ml 0,005 mólos és 700 ml 0,3 mólos vizes ammónium-acetát-oldattal gradiens-eluálásnak vetjük alá. A 235 ml és 385 ml közötti frakciókat összeöntjük, majd liofilizáljuk. így 476 mg (57,0%) mennyiségben a cím szerinti vegyületet kapjuk, amelynek fajlagos forgatóképessége [a]^5 = -38,8° (c = 0,25, vízben). Elemzési eredmények a C47H6301iN,,-C2H4(V5H20 képlet alapján: számított: C =53,10%, H = 7,00%, N =13,91%, talált: C =53,27%, -H =7,04%, N =13,82%. Aminosav-elemzés : Arg: 1,05, Thr: 1,00, Pro: 1,02, Gly: 0,95, Tyr: 0,95, Phe: 2,02, <3—Alá: 0,93 (peptidtartalom 85,5%). 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 17
