175306. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új polipeptidek előállítására
27 175306 28 számított: C = 57,81%, H = 7,28%, N = 14,05%, talált: C =57,72%, H =7,24%, N = 14,25%. Aminosav-elemzés : Arg: 1,07, Gly: 1,03%, Tyr: 0,87, Phe: 2,07, Leu: 1,00 (peptidtartalom 83,9%). 12. példa H-d-Ala-Arg-Phe-Phe-Phe-Tyr-NHí előállítása a) Z-0-Ala-Arg(NO2 )-Phe-Phe-Phe-Tyr(Bzl)-gyanta előállítása Szilárd fázisú peptidszintetizátor (típusa Simadzu APS-800, gyártja a Simadzu Seisakusho japán cég) reakcióterébe bemérünk 4,33 g BOC—Tyr(Bzl)-gyantát (Tyr-tartalma 2,18 millimól), majd a gyanta diklór-metánnal végzett duzzasztása után a reakciótérbe 8,72—8,72 millimól BOC—Phe—OH-t, BOC-Phe-OH-t, BOC-Phe-OH-t, BOC-Arg(N02 )-t és Z-0-Ala-OH-t adagolunk be az említett sorrendben. A reakciótérben a reagáltatás a DCC-módszerrel, közelebbről Merrifield módszerével, ([J. A. C. S., 86, 304 (1964)] történik. Miután minden reakció befejeződött, a gyantát egymás után diklór-metánnal, dimetil-formamiddal, etanollal, jégecettel és metanollal mossuk, ezt követően pedig szárítjuk. így 6,55 g mennyiségben a cím szerinti peptid-gyantát kapjuk. b) Z—d—Alá—Arg(N02)—Phe—Phe—Phe— —Tyr(Bzl)—NH2 előállítása 50 ml 17%-os metanolos ammónia-oldatban az a) lépésben kapott gyantából 6,04 g-ot szuszpendálunk, majd a kapott szuszpenziót szobahőmérsékleten 48 órán át keverjük. A gyantát ezután kiszűrjük, majd a szűrletet csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A maradékhoz dietilétert adunk, majd a képződött port kiszűrjük és szárítjuk. Hozam 2,43 g. c) H—d-Ala-Arg-Phe—Phe—Phe-Tyr-NH2 előállítása 30 30 ml jégecetben feloldunk a b) lépésben kapott nyers védett peptidamidból 500 mg-ot, majd a kapott oldaton katalizátorként palládiumkormot használva 10 órán át hidrogéngázt vezetünk keresztül. Ezután a katalizátort kiszűrjük, majd a szűrletet csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A maradékot 5 ml vízben feloldjuk, majd a vizes oldatot 2,6 cm-szer 24,5 cm méretű, karboximetil-cellulózzal töltött oszlopra felvisszük. Az oszlopot 800 ml 0,005 mólos és 800 ml 0,2 mólos vizes ammónium-acetát-oldattal gradiens-eluálásnak vetjük alá, majd az 1180 ml és 1545 ml közötti frakciókat összeöntjük és liofilizáljuk. így 232 mg (64%) mennyiségben a cím szerinti vegvületet kapjuk, amelynek fajlagos forgatóképessége [a]^4 =-33,19° (c = 0,46, vízben). Elemzési eredmények a C45H54O7N9 *2C2H4 02 • 3H20 képlet alapján: számított: C =58,44%, H =6,81%, N = 12,52%, talált: C =58,44%, H =6,24%, N = 12,86%. Aminosav-elemzés : Arg: 1,00, Tyr: 0,81, Phe: 3,20, 0—Ala: 0,90 (peptidtartalom 84,8%). 13. példa H—ß—Ala-Arg-Leu—Phe-Phe-Tyr—Gly—NH2 előállítása a) Z—0—Ala—Arg(Tos)—Leu—Phe—Phe—Tyr(Bzl)— —Gly-gyanta előállítása Szilárd fázisú peptidszintetizátor (Simadzu APS-800) reaktorterébe bemérünk 4,0 g BOC—Gly-gyantát (1,7 millimól ekvivalens Gly-t tartalmaz), majd a gyantát diklór-metánnal 20 órán át duzzasztjuk. A reaktortébe ezután egymást követően a felsorolás sorrendjében 6,8—6,8 millimól BOC-Tyr-(Bzl)-OH-t, BOC-Phe-OH-t, BOC-Phe-OH-t, BOC-Leu-OH-t, Aoc-Arg(Tos)-OH-t és Z-0- Ala- OH-t táplálunk be, kondenzálószerként DCC-vel egyegyütt. A reaktortérbe ugyanakkor a BOC csoport lehasításá. a trifluorecetsav és diklormetán 1 :1 arányú elegyét is. beadagoljuk. Miután a reakciók befejeződtek, a gyantát egymást követően diklór-metánnal, dimetil-formamiddal, metanollal, jégecettel és metanollal mossuk, végül pedig szárítjuk. így a cím szerinti gyantából 5,09 g-ot kapunk. b) Z—0—Ala—Arg(Tos)—Leu—Phe—Phe—Tyr(Bzl)— —Gly—NH2 előállítása 50 ml 17%-os metanolos ammónia-oldatban az a) lépésben kapott gyantából 4,4 g-ot szuszpendálunk, majd a reakcióedényt légmentesen elzárjuk és a szuszpenziót szobahőmérsékleten 48 órán át keverjük. A gyantát ezután kiszűrjük, majd dimetil-formamiddal mossuk. A szűrletet és a mosófolyadékot összeöntjük, majd csökkentett nyomáson bepároljuk. A visszamaradó olajhoz dietilétert adunk, majd pedig a képződött port kiszűrjük. így a cím szerinti vegyületből 950 mg-ot kapunk. c) H-0—Ala—Arg-Leu—Phe-Phe—Tyr—Gly—NH2 előállítása A b) lépésben kapott nyers védett peptidamidból 500mg-hoz 0,5 ml anizolt, majd 10 ml hidrogén-fluoridot adunk. A kapott keveréket 0°C-on 60 percen át keverjük, majd a hidrogén-fluoridot csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. A maradékot 50 ml vízben feloldjuk, az így kapott oldatot kétszer 20 ml dietiléterrel mossuk, 1 cm x 10 cm méretű, Amberlite IRA—410 márkanevű gyantából 5 10 IS 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 14
