175266. lajstromszámú szabadalom • Eljárás dezacetil 890 A1 és dezacetil 890 A3 előállítására
43 175266 44 Ezt a koncentrátumot 2,2 x 80 cm ágy-dimenziójú Bio—Gel P-2-vel, (200-400 mesh) töltött oszlopra visszük fel. A mintát kétszer 1 ml ionmentes vízzel mossuk 0,6 ml/min áramlási sebességgel. 3,04 ml-es frakciókat kapunk. 300 nm-nél az ultraibolya abszorpciós főcsúcs az 58-64. frakciókban jelentkezik és a maximumot a 60-as frakciónál éri el. A 83,7 A3 o0 egységet tartalmazó 59-62. frakciókat összeöntjük 2,2A3oo egységgel ekvivalens adagot referencialapként eltávolítunk és a maradé kot 1,5 ml térfogatra koncentráljuk, 14 ml-es üveg ampullában liofilizáljuk és így 3,9 mg N-acetil-tienamicint kapunk. Amax 301 nm, Emax/Emin =4,45, E%30i ionmentes vízben =208 Ennek a kiindulási anyagnak a 2. példa szerint dezacetilezésével kapjuk a tienamicin antibiotikumot. Az antibiotikumot tartalmazó készítményeket többféle dózisegység formában, például szilárd vagy folyékony, orálisan bevihető formában adagolhatjuk. A készítmények akár folyékonyak, akár szilárdak, dózis-egységenként 0,1-99% előnyösen 10—60% hatóanyagot tartalmazhatnak. A készítmény általában az összsúlyra számítva 25-1000 mg hatóanyagot tartalmaz, azonban általában előnyös, ha a dózis mennyisége 250—1000 mg között vagy még előnyösebben 400-800 mg között van. Parenterális adagolásnál a dózis-egység rendszerint maga a tiszta vegyület enyhén savas steril vizes oldatban vagy oldható por formájában. A következő modor, állítjuk elő az egyes kikészítésű formákat: Kapszula Kapszulánként N-acetil-tienamicin 0-ás kapszulák megtöltéséhez elegendő mennyiségű 400 mg laktóz U. S. P., egységenként Körülbelül 475 mg-ot töltünk a kapszulákba. A fenti példában a hatóanyagot és hígítószert jól összekeverjük, hogy homogén elegyet kapjunk, majd egyenként 475 mg-ot töltünk kézi vagy gépi úton kemény zselatin kapszulákba. A keverést és a töltést előnyösen olyan helyiségben végezzük, ahol a relatív nedvességtartalom kisebb, mint 40%. 10. példa A 890 A3 antibiotikum előállítása A Streptomyces flavogriseus MA-4434a liofilizált tenyészetét tartalmazó kémcsövet aszeptikusán felnyitjuk és a tartalmát 0,8 ml steril Davis sóoldatot tartalmazó kémcsőben szuszpendáljuk. Davis sóoldat összetétele: nátrium-citrát 0,5 g dikálium-hidrogénfoszfát 7,0 g kálium-dihidrogénfoszfát 3,0 g ammónium-szulfát-heptahidrát 1,0 g desztillált viz 1000 ml magnézium-szulfát-heptahidrát 0,1 g. Ezzel a szuszpenzióval beoltjuk az A táptalaj négy ferdetenyészetét: A táptalaj összetétele: glicerol 20,0 g primér élesztő 5,0 g halliszt 15,0 g desztillált víz 1000 ml agar 20,0 g nátrium-hidroxid hozzáadásával a pH-t 7,2-re állítjuk. A beoltott ferdetenyészeteket 27—28 C-on egy hétig inkubáljuk, majd felhasználásig 4-6 °C-on tároljuk (21 napnál nem hosszabb ideig). 10 ml alábbi összetételű B táptalajt aszeptikusán átviszünk egy ilyen ferdetenyészetbe, a spórákat és légmicéliumokat szuszpenzióba kaparjuk és a szuszpenzió 3,3 ml-ével beoltunk egy 500 ml B táptalajt tartalmazó 2 literes Erlenmeyer-lombikot. A B táptalaj összetétele: élesztő autolizátum (+Ardamin) 10,0 g glükóz 10,0 g foszfát-puffer 2,0 ml magnézium-szulfát-heptahidrát 50 mg desztillált víz 1000 ml. sósav vagy nátrium-hidroxid hozzáadásával a pH-t 6,5-re állítjuk. ♦Ardamin: Yeats Products Corporation Foszfát-puffer oldat kálium-dihidrogénfoszfát 91,0 g dinátrium-hidrogénfoszfát 95,0 g desztillált víz 1000 ml A ferdetenyészetet 28 °C-on 160 percenkénti fordulatszámmal 5,08 cm-es löketű rázóberendezésen rázatjuk 36 óra hosszat, amig a növekedés nem lesz kielégítő. A beoltott tenyészetet tartalmazó növekménnyel beoltunk egy 160 liter B táptalajt tartalmazó 189 literes rozsdamentes acélfermentort. A fermentort 28 °C-on működtetjük 24 óráig, a keverési sebesség 150 percenkénti fordulatszám és a levegő áramlási sebessége 1,41 liter/sec. Szükség esetén Polyglycol 2000(Dow Chemical Corp.) azonban 0,1%-ot meg nem haladó mennyiségű habzásgátlót használunk. A pH-értékeket a következőképpen határozzuk meg. kor (óra) 0 12 PH 6,3 6,35 A fermentorból származó 43 liter növekményt arra használjuk, hogy egy 467 liter C táptalajt 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 22
