175266. lajstromszámú szabadalom • Eljárás dezacetil 890 A1 és dezacetil 890 A3 előállítására
37 175266 38 talmazó 2 literes Erlenmeyer-lombikokat. A beoltott tenyészetet tartalmazó lombikokat 160 percenkénti fordulatszámú rázóberendezésben 24 óra hosszat rázatjuk 28 °C-on. A lombikok egyesített tartalmának 1000 ml-évei beoltunk egy 467 liter A-táptalajt tartalmazó 756 literes rozsdamentes acél fermentort. Ezt a tartályt 28 °C-on 130 percenkénti fordulatszámmal és 4,7 liter/sec levegő áramoltatási sebességgel működtetjük 24 óráig. Kívánt esetben Polyglycol 2000-t használunk habzásgátlóként 0,1%-nál nem nagyobb mennyiségben (Dow Chemical Corporation). A mért pH-értékeket és a dextróz mennyiségét a következő táblázat tartalmazza: Kor (óra) 0 12 24 pH 6,4 6,4 6,6 dextróz mg/ml 8,1 8,1 8,1 A növekmény 453 literével beoltunk egy 4082 E'-táptalajt tartalmazó 5670 literes rozsdamerttes acél fermentort. Az E-táptalaj összetétele a következő: E táptalaj keményítőcukor 25,0 g kukoricalekvár (nedves bázis) 15,0 g desztillációs maradék 10,0 g . gyapotmag közeg (Pharmamedia) 5,0 g kobalt-klordid-hexahidrát 0,01 g kalcium-karbonát (pH beállítás után) 3,0 g Polyglycol 2000 0,25 térfogat% csapvíz 1000 ml pH: nátrium-hidroxiddal 7,3-ra állítjuk be. Ezt a tartályt 24 °C-on működtetjük 70 percenkénti fordulatszámú keverési sebességgel és 25,5 liter/sec levegő áramoltatási sebességgel 144 órán keresztül. Kívánt esetben Polyglycol 2000 habzásgátlót adunk hozzá, 0,1%-ot nem meghaladó menÿnyiségben. A centrifugált lét Staphylococcus aureus ATCC 6538P kontoll alkalmazásával elemezzük lemez-diffúziós módszer segítségével. Az eredményeket az ATCC 6538P-hez viszonyított antibiotikum aktivitás című alábbi táblázat fejléc mutatja. Végeztünk lemez-diffúziós kísérleteket 9,5 millimétere^ szűrőpapír lemezek és 10ttù-es próbatenyészetek alkalmazásával is, melyek eredményeit az , ^Antibiotikum aktivitás (10ml-es lemezek)” című alábbi táblázat fejléc tartalmazza. A 10ml-es kísérleti tenyészeteket a következőképpen állítjuk elő: A kísérleti organizmus a Staphylococcus aureus ATCC 6538P törzs egy éjjelen keresztül növesztett növekményét 0,2% élesztőextraktumot tartalmazó táptalajjal hígítjuk, Qy módon 660 mp hullámhossznál 40%-os áteresztőképességű szuszpenziót kapunk. Ezt a szuszpenziót 2,0 g/liter Difco élesztő extraktummal kiegészített Difco tápagarhoz adjuk 47-48 °C-on és így 33,2 ml szuszpenzió agar liter koncentrációjú készítményt kapunk. A szuszpenzió 10 ml-ét 85 mm átmérőjű Petri-csészékbe öntjük, a csészéket hűtjük és felhasználásig 4°C-on tartjuk, (maximum 5 napig). Kor (óra) X CU Dextróz mg/ml Antibiotikum aktivitás ATCC 6538 P-hoz képest m 1 Antibiotikum aktivitás 10 ml lemeztenyészetek mm 0 6,6 22,2 12 6,3 20,2 24 5,8 18,0 0 36 6,0 13,2 21,5 48 6,0 8,6 21,5 60 5,7 6,4 26,5 72 5,8 2,7 25,5 84 6,2 0,3 27,5 96 6,4 0,2 36,0 108 6,4 0 35,0 120 6,3 41,5 37,0 132 5,8 37,5 144 5,9 43,0 37,5 4,082 liter fermentlevet 762 mm-es présszűrőn leszűrünk és 4 súly/térfogat % mennyiségben szűrési segédanyagot használunk. A szűrlethez 12 g/etilén-dinitril/-tetraecetsav-nátrium-sót adunk. A szűrletet 6 °C-ra hűtjük, és a pH-t 4,5±0,2-re állítjuk be, miközben a hőmérsékletet 6 °C-on tartjuk. A hideg szűrletet 480 liter Dowex 50x4 nátrium-ion (20-50 mesh) ioncserélő gyantán 481iter/min sebességgel adszorbeáltatjuk. Az adszorbeátumot 480 liter ionmentes vízzel mossuk, majd 2%-os vizes piridinnel eluáljuk 24 liter/min sebességgel. 300 liter, 520 liter és 240 liter térfogatú frakciókat fogunk fel és pH = 7 értéken vizsgáljuk. Az eredmények azt mutatják, hogy az eluált frakciók 4%, 16% és 6%-át tartalmazzák a Dowex 50x4 Na* oszlopra felvitt ossz. bioaktívitásnak. A 2-es eluált frakciót 48 literre besűrítjük és a pH-t 7-re állítjuk be. A 48 liter koncentrátumot pH = 7,3-ra állítjuk be és 76 liter Dowex 1 x 2, (50—100 mesh) kloridciklusú gyantán adszorbeáltatjuk 7,6 liter/min sebességgel. A gyantát ionmentes vízzel eluáljuk azonos sebesség mellett. Négy frakciót fogunk fel, kettő térfogata 48 liter, egyé 70 liter és egyé 48 liter. A frakciók pH-ját 7-re állítjuk be. Az eredmények szerint a kezdeti bioaktívitás 68%-a a 70 literes 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 19
