175266. lajstromszámú szabadalom • Eljárás dezacetil 890 A1 és dezacetil 890 A3 előállítására
33 175266 34 0,1-nél nagyobb abszorpciós képességet mutató frakciókat egyesítjük és vákuumban bepároljük és így 11,6 hidroxilamin-kioltási képességű optikai sűrűség egységet tartalmazó N-acetil-tienamicint kapunk. 7. példa N-Acetil-tienamicin előállítása fermentálással Ezzel a szuszpenzióval az A táptalaj (plusz agar) 4 ferde tenyészetét beoltjuk. Az A táptalaj összetétele a következő: A táptalaj élesztő-autolízis termék (Ar da mine*) 10,0 g glükóz 10,0 g foszfát-puffer 2,0 g magnézium-szulfát-heptahidrát 0,05 g desztillált víz 1000 ml +Ardamine: Yeast Products Corporation A pH-t nátrium-hidroxiddal 6,5-re állítjuk. Foszfát-puffer oldat kálíum-dihidrogén-foszfát dinátrium-hidrogén-foszfát desztillált víz 91.0 g 95.0 g 1000 ml 40 45 A ferde tenyészeteknél 25 g/liter agart adunk hozzá. A beoltott ferde tenyészeteket 1 hétig inkubáljuk 28 °C-on, majd 4 °C-on tároljuk. 50 10 ml A táptalajt (agar nélkül) aszeptikusán az egyik ferdetenyészetbe viszünk át, a spórákat és a légmicéliumokat szuszpenzióba kaparjuk és 1,2 ml szuszpenziót arra használunk, hogy három 500 ml A táptalajt (agar nélkül) tartalmazó inoculum te- 55 nyészet előállítására szolgáló 2 literes Erlenmeyer-lombikot beoltunk vele. Ezt a beoltott tenyészetet tartalmazó lombikot 28 °C-on 160 percenkénti fordulatszámú rázógéppel rázatjuk (5,08 cm-es löket) 24 óráig, ennyi idő alatt a növekedés kielégítő. 60 A beoltott tenyészeteket tartalmazó lombikok tartalmát összeöntjük és beoltunk vele egy 467 liter A táptalajt (agai nélkül) tartalmazó 756 literes rozsdamentes acél fermentort. Ezt a fermentort 24 órán keresztül és 130 percenkénti fordulatszámú 65 keverési sebességgel működtetjük, a levegő áramlási sebessége 4,7 liter/sec. Szükség szerinti mennyiségű, azonban 0,1%-ot meg nem haladó Poferglycol 2000 (Dow Chemical Corp.) habzásgátlót hjsználunk. A pH értékek a következők: Kor (óra) PH 6,3 24 6,4 10 A Streptomyces cattleya MA-4297 törzs liofilizált tenyészetét tartalmazó kémcsövet aszeptikusán felnyitjuk és a tartalmát Davis-sóoldatban szuszpen- 15 dáljuk. A sók összetétele a következő: Davis-sóoldat nátrium-citrát 0,5 g dikálium-hidrogén-foszfát 7,0 g kálium-dihidrogén-foszfát 3,0 g ammónium-szulfát 1,0 g magnézium-szulfát-heptahidrát 0,1 g desztillált víz 1000 ml Ebből a beoltott tenyészetet tartalmazó fermentorból 454 literrel beoltunk egy 4,082 liter E táptalajt tartalmazó 5,670 literes rozsdamentes acél fermentort. E táptalaj 20 25 30 35 25.0 g 15.0 g 10.0 g 5,0 g 0,01 g keményítőcukor kukoricalekvár (nedves bázis) desztillációs maradék gyapotmag közeg (Pharmamedio) kobalt-klorid-hexahidrát kalcium-karbonát (pH beállítás után) 3,0 g Polyglycol 2000 0,25 térfogat% csapvíz 1000 ml pH: nátrium-hidroxiddal 7,3-ra állítjuk be. Ezt a tartályt 24 °C-on 70 fordid&fperc keverési sebességgel 25,5 liter/sec levegőáramlási sebességgel 138 óra hosszat működtetjük. Kívánt esetben Polyglycol 2000 habzásgátló adalékot adunk hozzá, 0,1%-nál nem nagyobb mennyiségben. A baktérium-ellenes hatásra vonatkozóan teszteléseket folytatunk és az eredményeket a következő táblázat tartalmazza: Kor (óra) pH ATCC 6633 0,945 cm-es lemez mm 0 6,9 0 24 6,3 0 36 6,0 0 48 5,9 0 60 6,0 23 72 5,9-84 6,0 21 96 6,2-108 6,5 35 120 6,6 36 132 6,7 41 138 6,7 39 17
