175266. lajstromszámú szabadalom • Eljárás dezacetil 890 A1 és dezacetil 890 A3 előállítására
29 175266 30 pH = 6,3 - egyensúlyba hoztunk. 1 ml/min sebességgel pufferrel hajtjuk végre az eluálást. Az oszlopról lefolyó 25 nú eluálószert követően 35 nú-t gyűjtünk össze és liofilizáljuk. A liofilizált szilárd anyagot 0,5 ml 0,1M 2,6-lutidin-acetát pufferben oldjuk, pH = 7,0. Az oldatot Bio—Gel P—2 (200—400 mesh), 1 cm átmérőjű és 50 cm magasságú előzőleg a pufferrel kiegyensúlyozott oszlopra visszük. A gélt ugyanazzal a pufferrel hívjuk elő 0,5 ml/min sebességgel. Az oszlopról lefolyó 25 ml eluálószer után a következő 10ml-t összegyűjtjük és liofilizáljuk. A liofilizált szilárd anyagot 4 ml desztillált vízzel oldjuk és 1,7 cm átmérőjű 90 ml előmosott és 5 °C-on desztillált vízzel egyensúlyba hozott XAD-2-vel töltött oszlopra visszük. A XAD-2-t előzőleg egymást követően 5 térfogat IN nátrium-hidroxiddal, ionmentes vízzel mossuk, utóbbival addig, amíg a kifolyó anyaga semleges nem lesz, majd 5 térfogat IN sósavval, ionmentes vízzel, amíg a kifolyó anyag nem lesz semleges, majd 5 térfogat metanollal, acetonnal, 0,001 M EDTAtetranátrium sóval majd végül desztillált vízzel. A minták után kétszerV' 2 ml desztillált vizet viszünk az oszlopra. Az oszlopot 2 ml/min sebességgel desztillált vízzel hívjuk elő. Négy ml-es eluált frakciókat fogunk fel. A 25—58-as frakciókat összeöntjük és liofilizáljuk. Dezacetil 890 Aj-t kapunk. 6. példa N-Acetil-tienamicin előállítása fermentálással A Streptomyces cattleya NRRL 8057 törzs liofilizált tenyészetét tartalmazó kémcsövet aszeptikusán felnyitjuk és a tartalmát 0,8 ml-es steril Davis-sóoldatot tartalmazó kémcsőbe helyezzük, a sóoldat összetétele a következő: Davis-sóoldat: nátrium-citrát 0,5 g dikálium-hidrogén-foszfát 7,0 g kálium-dihidrogén-foszfát 3,0 g ammónium-szulfát 1,0 g magnézium-szulfát-heptahidrát 0,1 g desztillált víz 1000 ml Ezzel a szuszpenzióval beoltjuk az A táptalaj (plusz agar) ferde tenyészetét. Az A táptalaj összetétele a következő: A táptalaj élesztő-autolízis termék (Ardaminx) 10,0 g glükóz 10,0 g foszfát-puffer 2,0 ml magnézium-szulfát-heptahidrát 0,05 g desztillált víz 1000 ml pH: nátrium-hidroxiddal 6,5-re állítjuk be. xArdamin: Yeast Products Corporation Foszfát-puffer oldat kálium-dihidrogén-foszfát 91,0 g dinátrium-hidrogén-foszfát 95,0 g desztillált víz i000 ml Ferde tenyészetek előállításánál 25,0 g/liter agart adunk hozzá. A beoltott ferde tenyészeteket 1 hétig inkubáljuk 28 °C-on, majd 4 °C-on tároljuk. 10 ml A táptalajt (agar nélkül) aszeptikusán az egyik ferdetenyészetbe viszünk át, a spórákat és a légmicéliumokat szuszpenzióba kapaijuk és 1,2 ml szuszpenziót arra használunk, hogy három 500 ml A táptalajt (agar nélkül) tartalmazó inoculum tenyészet előállítására szolgáló 2 literes Erlenmeyer-lombikot beoltunk vele. Ezt a beoltott tenyészetet tartalmazó lombikot 28 °C-on 160 percenkénti fordulatszámú rázógéppel rázatjuk (5,08 cm-es löket) 24 óráig, ennyi idő alatt a növekedés kielégítő. A beoltott tenyészeteket tartalmazó lombikok tartalmát összeöntjük és beoltunk vele egy 467 liter A táptalajt (agar nélkül) tartalmazó 756 literes rozsdamentes acél fermentort. Ezt a fermentort 24 órán keresztül és 130 percenkénti fordulatszámú keverési sebességgel működtetjük, a levegő áramlási sebessége 4,7 liter/sec. Szükség szerinti mennyiségű, azonban 0,1%-ot meg nem haladó Polyglycol 2000 (Dow Chemical Corp.) habzásgátlót használunk. A pH értékek a következők: Kor (óra) 0 24 pH 6,3 6,4 Ebből a beoltott tenyészetet tartalmazó fermentorból 454 literrel beoltunk egy 4,082 liter E táptalajt tartalmazó 5,670 literes rozsdamentes acél fermentort. E táptalaj keményítőcukor 25,0 g kukoricalekvár (nedves bázis) 15,0 g desztillációs maradék 10,0 g gyapotmag közeg (Pharma me dia) 5,0 g kobalt-klorid-hexahidrát 0,01 g kalcium-karbonát (pH beállítás után) 3,0 g Polyglycol 2000 0,25 térfogat% csapvíz 1000 ml pH: nátrium-hidroxiddal 7,3-ra állítjuk be. Ezt a tartályt 24 °C-on 70 fordulat/perc keverési sebességgel 25,5 liter/sec levegőáramlási sebességgel 138 óra hosszat működtetjük. Kívánt esetben Polyglycol 2000 habzásgátló adalékot adunk hozzá 0,1%-nál nem nagyobb mennyiségben. A baktériumellenes hatásra vonatkozóan teszteléseket folytatunk és az eredményeket a következő táblázat tartalmazza: 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 15
