175265. lajstromszámú szabadalom • Eljárás N-acetil-tienamicin előállítására
29 175265 30 kéníi fordulatszámú^ rázóberendezésben 24 óra koncentrációjú készítményt kapunk. A szuszpenzió hosszat rázatjuk 28 C-on. A lombikok egyesített 10ml-ét 85 mm átmérőjű Petri-csészékbe öntjük, a tartalmának 1000ml-ével beoltunk egy 467 liter A csészéket hűtjük és felhasználásig 4 °C-on tartjuk táptalajt tartalmazó 756 literes rozsdamentes fér- (maximum 5 napig). mentort. Ezt a tartályt 28 °C-on 130 percenkénti j fordulatszámmal és 4,7 liter/sec levegő áramoltatási sebességgel működtetjük 24 óráig. ~ Kívánt esetben Polyglycol 2000-t használunk ° C-C c habzásgátlóként, 0,1%-nál nem nagyobb mennyiségg a, E C E , e ben. (Dow Chemical Corp.). A mért pH-értéiceket és a dextróz mennyiséget a következő táblázat 10 N 3 00 rt M m £ •r* in 0.3 b 3 JX s.* E " -SS “ s tartalmazza: CÜ t-H O X a Dextn mg/ml 2r O 0 ■n .2 U N c ts H 8 < "3 < '5-Û C < ■*-» fri :£!■& ■2 0 g Kor (óra) 0 12 24 15 0 6,6 22,2 pH 6,4 6.4 6,6 12 6,3 20,2 dextróz mg/ml 8,1 8,1 8,1 20 24 5,8 18,0 0 A növekmény 453 literével beoltunk egy 4082 - liter E táptalajt tartalmazó 5670 literes rozsdámén-36 6,0 13,2 21,5 tes acél fermentort. Az E táptalaj összetétele a 48 6,0 8,6 21,5 következő: 25 60 5,7 6,4 26,5 E táptalaj 72 5,8 2,7 25,5 keményítőcukor 25,0 g kukoricalekvár (nedves bázis) 15,0 g 84 6,2 0,3 27,5 desztillációs maradék 10,0 g 30 gyapotmag közeg (Pharmamedia) kobalt-klorid-hexahidrát 5,0 g 0,01 g 96 6,4 0,2 36,0 kalcium-karbonát 108 6,4 0 35,0 (pH beállítás után 3,0 g Polyglycol 2000 0,25 térfogat% 35 120 6,3 41,5 37,0 csapvíz 1000 ml 132 5,8 37,5 pH: nátrium-hidroxiddal 7,3-ra állítjuk be. 144 5,9 43,0 37,5 Ezt a tartályt 24 °C-on működtetjük 70 percen- 40 kénti fordulatszámú keverési sebességgel és 25,5 li- 4,082 liter fermentlevet 762 mm-es présszűrőn ter/sec levegő áramoltatási sebességgel 144 órán leszűrünk és 4 súly/térfogat% mennyiségben szűrési keresztül. Kívánt esetben Polyglycol 2000 habzás- segédanyagot használunk. A szűrlethez 12 g(etiléngátlót adunk hozzá, 0,1%-ot nem meghaladó meny- -dinitril)-tetraecetsav-nátrium-sót adunk. A szűrletet nyiségben. 45 6 °C-ra hűtjük, és a pH-t 4,5±0,2-re állítjuk be, A centrifugált lét Staphylococcus ATCC 6538P miközben a hőmérsékletet 6 °C-on tartjuk. A hideg kontroll alkalmazásával elemezzük lemez-diffúziós szűrletet 480 liter Dowex 50 x 4 nátrium-ion módszer segítségével. Az eredményeket az alábbi (20—50 mesh) fázisú ioncserélő gyantán 48 liter-ATCC 6538P-hez viszonyított antibiotikum aktivi- /min sebességgel adszorbeáltatjuk. Az adszorbeátutás című táblázat-fejléc alatt találjuk. Végeztünk 50 mot 480 liter ionmentes vízzel mossuk, majd 2%-os lemezdiffúziós kísérleteket 9,5 milliméteres szűrő- vizes piridinnel eluáljuk 24 liter/min sebességgel, papír lemezek és 10ml-es próbatenyészetek alkal- 300 liter, 520 liter és 240 liter térfogatú frakciókat mazásával is, melyek eredményeit az Antibiotikum fogunk fel és pH = 7 értéken vizsgáljuk. Az eredméaktivitás (10ml-es lemezek) c. táblázat-fejléc alatt nyék azt mutatják, hogy az eluált frakciók 4%, találjuk. 55 16% és 6%-át tartalmazzák a Dowex 50x4 Na* A 10ml-es kísérleti tenyészeteket a következő- oszlopra felvitt ossz bioaktivitásnak. A 2-es eluált képpen állítjuk elő: frakciót 48 literre besűrítjük és a pH-t 7-re állítjuk A kísérleti organizmus, a Staphylococcus aureus be. A 48 liter koncentrátumot pH = 7,3-ra állítjuk ATCC 6538P törzs egy éjjelen keresztül növesztett be és 76 liter Dowex 1 x2, (50—100 mesh) kloridnövekményét 0,2% élesztő extraktumot tartalmazó 60 -ciklusú gyantán adszorbeáltatjuk 7,6 liter/min setáptalajjal hígítjuk, ily módon 660 mß hullámhossz- bességgel. A gyantát ionmentes vízzel eluáljuk azonál 40%-os áteresztőképességű szuszpenziót kapunk. nos sebesség mellett. Négy frakciót fogunk fel, Ezt a szuszpenziót 2,0 g/liter Difco élesztő extrák- kettő térfogata 48 liter egyé 70 liter és egyé 48 litummal kiegészített Difco tápagarhoz adjuk 47- ter. A frakciók pH-ját 7-re állítjuk be. Az ered—48 °C-on és így 33,2 ml szuszpenzió (agar liter 65 mények szerint a kezdeti bioaktivitás 68%-a a 15
