175265. lajstromszámú szabadalom • Eljárás N-acetil-tienamicin előállítására
25 175265 26 nagyobb abszorpciós képességet mutató frakciókat egyesítjük és vákuumban bepároljuk és így 11,6 hidroxilamin-kioltási képességű optikai sűrűséget tartalmazó N-acetil-tienamicint kapunk. 4. példa A Streptomyces cattleya NRRL 8057 liofilizált tenyészetét tartalmazó kémcsövet aszeptikusán felnyitjuk és a tartalmát 0,8 ml steril Davis-sóoldatot tartalmazó kémcsőbe helyezzük. A sóoldat összetétele a következő: Davis-sóoldat nátrium-citrát 0,5 g dikálium-hidrogén-foszfát 7,0 g kálium-dihidrogén-foszfát 3,0 g ammónium-szulfát 1,0 g magnézium-szulfát-heptahidrát 0,1 g desztillált víz 1000 ml Ezzel a szuszpenzióval az A táptalaj (plusz agar) 4 ferde tenyészetét beoltjuk. Az A táptalaj összetétele a következő: A táptalaj élesztő-autolízis termék (Ardaminex) 10,0 g glükóz 10,0 g foszfát-puffer 2,0 ml magnézium-szulfát-heptahidrát 0,05 g desztillált víz 1000 ml A pH-t nátrium-hidroxiddal 6,5-re állítjuk. xArdamine: Yeast Products Corporation Foszfát-puffer oldat kálium-dihidrogén-foszfát 91,0 g dinátrium-hidrogén-foszfát 95,0 g desztillált víz 1000 ml A beoltott ferde tenyészeteket 1 hétig inkubáljuk 28 °C-on, majd 4 °C-on tároljuk. Az A táptalaj 10 ml-ét aszeptikusán az egyik ilyen ferde tenyészetbe átvisszük, a spórákat és légmicéliumokat szuszpenzióba kaparjuk és a szuszpenzió 1,2 ml-ét 500 ml A táptalajt tartalmazó 2 literes Erlenmeyer lombikba oltjuk. Ezt az oltott tenyészetet tartalmazó lombikot 28 °C-on 160 percenkénti fordulatszámú 5,08 löketű rázógépen 24 óráig rázatjuk, ennyi idő múlva a növekedés kielégítő. Az ebből az oltási tenyészetet tartalmazó lombikból származó növekményt arra használjuk, hogy egy 467 liter A táptalajt (agar nélkül) tartalmazó 756 literes rozsdamentes acéltartályt beoltunk a növekménnyel. Ezt a tartályt 28 °C-on működtetjük. A keverési sebesség 130 fordulat/perc, a levegő áramlási sebessége 4,7 liter/sec, 24 óra hosszat működtetjük a tartályt. Kívánt esetben Polyglycol 2000 (Dow Chemical Corp.) habzásgátlót használunk 0,1%-ot nem meghaladó mennyiségben. A pH-t a következőképpen határozzuk meg: Kor (óra) 0 24 PH 6,3 6,4 Az ebből az oltási tenyészetet tartalmazó tartályból származó növekmény 454 literével beoltjuk a 4 082 liter/E táptalajt tartalmazó 5670 literes rozsdamentes acél fermentort. Az E táptalaj összetétele a következő: E táptalaj keményítőcukor 25,0 g kukoricalekvár (nedves bázis) 15,0 g desztillációs maradék 10,0 g gyapotmag közeg (Pharmamedia) 5,0 g kobalt-klorid-hexahidrát 0,01 g kalcium-karbonát (pH beállítás után) 3,0 g Polyglycol 2000 0,25 térfogati csapvíz 1000 ml pH: nátrium-hidroxiddal 7,3-ra állítjuk be. Ezt a tartályt 24 °C-on 70 fordulat/perc keverési sebességgel 2 5,521iter/sec levegőáramlási sebességgel 138 óra hosszat működtetjük. Kívánt esetben Polyglycol 2000 habzásgátló adalékot adunk hozzá, 0,1%-nál nem nagyobb mennyiségben. A baktérium-ellenes aktivitásra vonatkozóan teszteléseket folytatunk és az eredményeket a következő táblázat tartalmazza: Óra pH Antibiotikum aktivitás —(ATCC 6633) 0,945 cm lemez mm 0 6,9 0 24 6,3 0 36 6,0 0 48 5,9 0 60 6,0 23 72 5,9 0 84 6,0 21 96 6,2 0 108 6,5 35 120 fS.Ö 36 132 0,7 41 138 b,1 39 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
