175264. lajstromszámú szabadalom • Eljárás tienamicin elkülönítésére és tisztítására
7 175264 S Az egyes tisztítási műveletek sorrendje nem döntő jelentőségű tényező, előnyösnek találtuk azonban, ha a viszonylag szennyezett fermentleveket először ioncserélő gyantán végzett kromatografálással tisztítjuk, míg a gélszűrést és az adszorbens-gyantán végzett kromatografálást a legalább részlegesen tisztított oldatok további tisztítására alkalmazzuk. A tienamicint például a következőképpen különíthetjük el fermentlevéből vagy oldataiból: fermentlevet vagy az antibiotikumot tartalmazó oldatot szulfonsav-csoportokat hordozó kationcserélő gyantával töltött oszlopon bocsátjuk át, a gyantát bázissal eluáljuk, az eluátumot összegyűjtjük, az aktív frakciókat egyesítjük, majd az aktív frakciókat legföljebb 1800-as molekulasúlyú poliakrilamid-gélen vagy legföljebb 700-as molekulasúlyú dextrángélen bocsátjuk át, a gélt vízzel vagy rövidszénláncú alkanol és víz elegyével eluáljuk, az eluátumot összegyűjtjük, és az aktív frakciókat egyesítjük. Egy másik előnyös műveletsor szerint a fermentlevet vagy az antibiotikumot tartalmazó oldatot szulfonsav-csoportokat hordozó kationcserélő gyantával töltött oszlopon bocsátjuk át, a gyantaoszlopot bázissal eluáljuk, az eluátumot összegyűjtjük, az aktív frakciókat egyesítjük, az aktív frakciókat polisztirol-kvatemer ammóniumsó típusú anioncserélő gyantával töltött oszlopon bocsátjuk át, az eluátumot összegyűjtjük, az eluátumot legföljebb 1800-as molekulasúlyú poliakrilamid-gélen vagy legföljebb 700-as molekulasúlyú dextrángélen bocsátjuk át, a gélt vízzel vagy rövidszénláncú alkanol és víz elegyével eluáljuk, az eluátumot összegyűjtjük, és az aktív frakciókat egyesítjük. Egy további előnyös műveletsor szerint a következőképpen járunk el: a fermentlevet vagy az antibiotikumot tartalmazó oldatot szulfonsav-csoportokat hordozó kationcserélő gyantával töltött oszlopon bocsátjuk át, a gyantaoszlopot bázissal eluáljuk, az eluátumot összegyűjtjük, az aktív frakciókat egyesítjük, az egyesített aktív frakciókat polisztirol-kvaterner ammóniumsó típusú anioncserélő gyantával töltött oszlopon bocsátjuk át, az eluátumot betöményítjük, a kapott koncentrátumot polisztirollal vagy hidrofób, térhálós divinilbenzol-polimerrel töltött oszlopon bocsátjuk át, az oszlopot vízzel vagy foszfátpuffer-oldattal eluáljuk, az eluátumot összegyűjtjük, az aktív frakciókat egyesítjük, és amennyiben eluálószerként foszfátpuffer-oldatot használtunk fel, az utolsó adszorpciós-elúciós lépést divinilbenzol-polimer adszorbens és víz eluálószer felhasználásával megismételjük. A találmány értelmében a tienamicint úgy különíthetjük el tienamicint és szervetlen ionokat tartalmazó oldataiból, hogy az oldatot XAD—2 polisztirol-gyantával (gyártja a Rohm and Haas Co, Amerikai Egyesült Államok) töltött oszlopon bocsátjuk át, majd a gyantaoszlopot vízzel eluáljuk. Az eluátum a tienamicint sómentes állapotban tartalmazza. A tienamicin elkülönítését és tisztítását továbbá úgy is végrehajthatjuk, hogy a fermentlevet vagy az antibiotikum oldatát szulfonsav-csoportokat hordozó kationcserélő gyantával töltött oszlopon bocsátjuk át, a gyantaoszlopot bázissal eluáljuk, az eluátumokat összegyűjtjük, az aktív frakciókat egyesítjük, az aktív frakciókat polisztirol-kvatemer ammóniumsó típusú anioncserélő gyantával töltött oszlopon bocsátjuk át, az effluenst összegyűjtjük, az effluenst aromás gyűrűhöz kötött szulfonsav-csoportokat hordozó kationcserélő gyantával töltött oszlopon bocsátjuk át, a gyantaoszlopot pufferoldattal vagy vízzel eluáljuk, az aktív frakciókat egyesítjük, az aktív frakciókat legföljebb 1800-as molekulasúlyú poliakrilamid-gélen vagy legföljebb 700-as molekulasúlyú dextrángélen bocsátjuk át, a gélt vízzel, híg vizes pufferoldattal vagy rövidszénláncú alkanol és víz elegyével eluáljuk, az eluátumot összegyűjtjük, az aktív frakciókat egyesítjük, végül az aktív frakciókat betöményítjük, a koncentrátumot XAD-2 polisztirol-gyantával (gyártja a Rohm and Haas Co.) töltött oszlopon bocsátjuk át, és a gyantaoszlopot vízzel eluáljuk. A találmány értelmében a következőképpen is eljárhatunk: a fermentlevet vagy az antibiotikum oldatát szulfonsav-csoportokat hordozó kationcserélő gyantával töltött oszlopon bocsátjuk át, a gyantaoszlopot bázissal eluáljuk, az eluátumot összegyűjtjük, az aktív frakciókat egyesítjük, az aktív frakciókat polisztirol-kvaterner ammóniumsó típusú anioncserélő gyantával töltött oszlopon bocsátjuk át, az effluenst összegyűjtjük, az effluenst aromás gyűrűhöz kötött szulfonsav-csoportokat hordozó kationcserélő gyantával töltött oszlopon bocsátjuk át, a gyantaoszlopot vízzel vagy pufferoldattal eluáljuk, az aktív-eluátumfrakciókat egyesítjük az aktív frakciókat legföljebb 1800-as molekulasúlyú poliakrilamid-géllel vagy legföljebb 700-as molekulasúlyú dextrángéllel töltött oszlopon bocsátjuk át, a gélt vízzel, híg vizes pufferoldattal vagy vizes rövidszénláncú alkanollal eluáljuk, az eluátumot összegyűjtjük, az aktív frakciókat egyesítjük, végül az aktív frakciókat betöményítjük, a koncentrátumot XAD-2 polisztirol-gyantával (gyártja a Rohm and Haas Co.) töltött oszlopon bocsátjuk át, és a gyantaoszlopot vízzel eluáljuk. A tisztítási lépéseket például a következő sorrendben végezhetjük: 1. Kromatografálás kationcserélő gyantán, kromatografálás anioncserélő gyantán, ismételt kromatografálás kationcserélő gyantán, adszorpció adszorbens-gyantán, elúció, ismételt adszorpció adszorbens-gyantán és ismételt elúció. 2. Kromatografálás kationcserélő gyantán, kromatografálás anioncserélő gyantán, ismételt kromatografálás kationcserélő gyantán, adszorpció adszorbens-gyantán, elúció, gélszűrés. 3. Kromatografálás anioncserélő gyantán, kromatografálás kationcserélő gyantán, gélszűrés, adszorpció adszorbens-gyantán, elúció. A következőkben a tienamicin tisztításának egy előnyös módszerét részletesen ismertetjük. A tisztítás első lépésében a tienamicint erősen savas kationcserélő gyantán adszorbeáltatjuk. A gyanta ellenionként a szokásos ellenionokat (például nátrium- vagy kálium-ion) tartalmazhatja. Gyantaként például sztirol-divinilbenzol alapú, aromás gyűrűhöz kapcsolt szulfonsav-csoportokat hor5 10 15 Q0 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
