175264. lajstromszámú szabadalom • Eljárás tienamicin elkülönítésére és tisztítására
5 175264 6 A vizes közegek szerveden sóként például nátrium-, kálium-, ammonium-, kalcium-, foszfát-, szulfát-, klorid- és karbonát-ionokat szolgáltató vegyületeket, továbbá nyomelemeket, így kobaltot, mangánt, vasat és magnéziumot tartalmazhatnak. A tienamicin-termelő Streptomyces cattieya-törzs fermentációjához felhasználható vizes közegek egyes jellegzetes képviselőit a példákban részletesen ismertetjük, megjegyezzük azonban, hogy a fermentáció a példákban megadottaktól eltérő összetételű vizes közegekben is végrehajtható. A Streptomyces cattieya-törzs fermentációja körülbelül 20—37 °C-on hajtható végre, optimális eredmények biztosítása érdekében a fermentációt rendszerint körülbelül 22-30 °C-on végzik. A táptalaj pH-értéke körülbelül 6,0 és 8,0 között változhat. A tienamicin antibiotikum felszíni és szubmerz tenyésztéssel egyaránt előállítható, az antibiotikum-termelést azonban rendszerint előnyösen szubmerz tenyésztéssel végzik. A tienamicin számos Gram-pozitív és Gram-negatív baktériummal szemben erős antibiotikus hatást fejt ki, következésképpen a humán- és állatgyógyászatban antibiotikumként alkalmazható. A tienamicin igen előnyösen használható fel például a Staphylococcus aureus, Proteus mirabilis, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa és Enterobacter cloaceae törzsek által okozott fertőzések kezelésére. A tienamicint továbbá konzerválóanyagként vagy fertőtlenítőszerként állati takarmányokhoz keverhetjük. A tienamicint tartalmazó (például 0,1-100 ppm tienamicin-tartalmű) vizes kompozíciók továbbá az orvosi és fogászati műszereken megtapadt baktériumok elroncsolására, illetve növekedésük meggátlására alkalmazhatók. A felsorolt alkalmazási területeken kívül a tienamicint az iparban is felhasználhatjuk például a vizes festékekben vagy papíripari áztató levekben megtelepedett káros baktériumok növekedésének visszaszorítására. A tienamicint a humán- és állatgyógyászatban általában gyógyászati készítmények formájában használhatjuk fel. Orális adagolás céljára például tablettákat vagy kapszulákat állíthatunk elő, amelyek a hatóanyagon kívül szokásos gyógyszerészeti hígító- és/vagy segédanyagokat tartalmazhatnak. A tablettákat kívánt esetben bevonattal láthatjuk el. Orális adagolás céljára továbbá folyékony készítményeket, így vizes vagy olajos szuszpenziókat, oldatokat, emulziókat, szirupokat vagy elixíreket is előállíthatunk. Az orálisan adagolható gyógyászati készítményeket porkészítmények formájában is forgalomba hozhatjuk, amelyeket közvetlenül a beadás előtt vízzel vagy más folyékony közeggel hígítunk. A folyékony készítmények szokásos gyógyszerészeti hordozó- és/vagy segédanyagokat tartalmazhatnak. A tienamicint szokásos kúp-alapanyagok, például kakaóvaj vagy egyéb gliceridek felhasználásával kúpok formájában is kikészíthetjük. Az injektálható készítményeket ampullás dózisegységek vagy több dózisegységet tartalmazó, nagyobb tartályba kiszerelt készítmények formájában hozhatjuk forgalomba. E készítmények például vizes vagy olajos szuszpenziók, oldatok vagy emulziók lehetnek, amelyek a hatóanyagon és a hordozóanyagon kívül egyéb segédanyagokat, például szuszpendálószereket, stabilizálószereket és/vagy diszpergálószereket is tartalmazhatnak. Az injekciós készítményeket porampullás kiszerelésben is forgalomba hozhatjuk, ezeket a porkészítményeket közvetlenül beadás előtt hígítjuk a megfelelő folyékony közeggel (például steril, pirogén anyagot nem tartalmazó vízzel). A gyógyászati készítmények adott esetben egyéb segédanyagokat, például stabilizálószereket, kötőanyagokat, antioxidánsokat, konzerváló szereket, kenőanyagokat, szuszpendálószereket, viszkozitásnövelő anyagokat vagy ízesítőanyagokat is tartalmazhatnak. Állatgyógyászati felhasználás céljára (például szárnyasok, szarvasmarhák, juhok vagy sertések kezelésére) azonnal ható vagy nyújtott hatású intramammális készítményeket is előállíthatunk. A humán gyógyászatban a bakteriális fertőzések kezelésére a tienamicint általában körülbelül 2-600 mg/kg-os, előnyösen körülbelül 5-100 mg/kg-os napi dózisban adjuk be orális vagy parenterális úton. Ezt a hatóanyagmennyiséget előnyösen napi több (például 3 vagy 4) részletre elosztva adagoljuk. A kezeléshez szükséges hatóanyagmennyiséget például 25, 250, 500 vagy 1000 mg hatóanyagot tartalmazó dózisegységek formájában adhatjuk be, ezek a dózisegységek folyékony készítmények (például oldatok vagy szuszpenziók) vagy szilárd gyógyszerformák (például tabletták vagy kapszulák) lehetnek. A kezeléshez szükséges tienamicin-mennyiség a kezelendő egyén egészségi állapotától és testsúlyától, a kórokozó jellegétől, a fertőzés súlyosságától, továbbá a gyógyszeres kezelés módjától és gyakoriságától függően változik. Gyomor- és bélfertőzések kezelése esetén a hatóanyagot előnyösen orálisan adjuk be, míg generalizált fertőzések kezelése esetén célszerűbbnek tartjuk, a parenterális adagolást. Itt jegyezzük meg, hogy a gyermekgyógyászatban a fent ismertetett alsó határértéknél kisebb mennyiségű hatóanyag beadásával is általában jó eredményeket érhetünk el. A találmány szerinti eljárásban feldolgozásra kerülő, tienamicint tartalmazó fermentlevek aktivitása általában 50 és 400 egység/ml között változik (az aktivitást korong-diffúziós módszerrel, Staphylococcus aureus ATCC 6538P mikroorganizmussal szemben határozzuk meg). A találmány szerinti eljárás minden olyan fermentlé feldolgozására alkalmas, amelynek aktivitása eléri vagy meghaladja a 2 egység/mg száraz anyag értéket. A következőkben a találmány szerinti antibiotikum-elkülönítési és tisztítási módszereket ismertetjük. Az egyik módszer szerint a tienamicint erősen savas kationcserélő gyantán adszorbeáltatjuk savas pH-n, majd az antibiotikumot vizes szerves bázissal oldjuk le. A kapott eluátumot a következő módszerekkel tisztíthatjuk: polisztirol-kvatemer ammónium-ion típusú anioncserélő gyantán végzett kromatografálás, kationcserélő gyantán végzett kromatografálás víz vagy pufferoldat felhasználásával, gélszűrés, adszorbens-gyantán végzett kromatografálás. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
