175190. lajstromszámú szabadalom • Eljárás inozin előállítására
175190 vetien sókat, színes vegyületeket, továbbá savas és bázikus szerves anyagokat. A találmány értelmében az ismert eljárás hátrányait kívánjuk kiküszöbölni. A találmány szerint az inozint mutagén kezeléssel kialakított új termelő törzs és új összetételű táptalaj felhasználásával, a korábban elérhetőnél nagyobb termelékenységgel állítjuk elő. A találmány tárgya tehát eljárás inozin előállítására egy Bacillus subtilis törzsnek szén- és nitrogénforrást, valamint ásványi sókat tartalmazó táptalajon végzett tenyésztése, a képződött biomassza elválasztása és a végtermék elkülönítése utján. A találmány szerint a fermentáció során termelő törzsként Bacillus subtilis CMPMB-1321 törzset alkalmazunk, és a tenyésztést 30-31 C°-on, 35-40 mg 02/l/perc levegőztetési sebességgel végezzük. A Bacillus subtilis CMPMB—1321 törzs a Bacillus subtilis GEN-265 törzsből ultraibolya besugárzással kialakított új mutáns. E törzs morfológiai és fiziológiai jellemzői a következők: Morfológiai jellemzők: A törzs 3-5 x 0,6-0,8 /i méretű spórákat képez. A törzs hús-pepton-agar táptalajon 48 órán át 37 C°-on tenyésztve sárgásszürke, köralakú, boltozatos közepű, 2,5-3,0 mm átmérőjű telepeket képez, a szubsztrátummal összenőtt peremekkel. A telepek felülete bolyhos, redős és matt. Ha a törzset hús-pepton-húsleves táptalajon 24 órán át 37 C°-on rázás nélkül tenyésztjük, a táptalajmegzavarosodik, és a táptalaj felületén redős, száraz film képződik. Ha a törzset ugyanezen a táptalajon rázósztaíon végzett rázás közben tenyésztjük, a táptalaj erősen megzavarosodik, és állás közben csapadék válik ki a rendszerből. A törzs Hottínger-féle agaros táptalajon 48 órán át 37 C°-on tenyésztve sárgásszürke, kerek, boltozatos közepű, fehérrel árnyalt, 2,0-2,5 mm átmérőjű telepeket képez, a szubsztrátummal összenőtt peremekkel. A telepek felülete redős, bolyhos és matt. A törzs burgonyaszeleteken tenyésztve nem képez pigmentet; a kialkuit növekmény felülete matt, száraz és redős. Fiziológiai jellemzők: A törzs Gram-pozitív, aerob, a zselatint elfolyósítja, a keményítőt elhidrolizálja, a tejet peptonizálja és megsavanyítja. A törzs glükózt, galaktózt, laktózt, fruktózt, maltózt, mannózt, ramnózt, szacharózt és glicerint asszimilál. A törzs szintetikus táptalajokon adenin-, tirozin- és hisztidin-adalék jelenlétében növekedik. A törzs aktivitása 65-120 órás fermentáció esetén 10-12 g/1. A törzset a Szovjetunió Minisztertanácsa Mikrobiológiai Ipari Főigazgatósága alá rendelt Ipari Mikroorganizmusok ősszoroszországi Genetikai és Szelekciós Kutatóintézetének törzsgyüjteményében helyeztük letétbe 1976. május 6-án, és fagyasztva szárított állapotban, üvegampullákban tároljuk. Fermentációs közegként célszerűen a következő összetételű táptalajt alkalmazzuk: technikai glükóz vagy cukor 10,0 súly% fehéije-vitamin koncentrátum (nedvesség-tartalom 7—12%, hamutartalom 8-10%, aminnitrogén tartalom 03-0,4%, szárazanyag-tartalomra vonatkoztatott vitamin-tartalom 1%0 2,0 súly% magnéziumklorid 0,5 súly% ammóniumnitrát 2,0 súly% .kalciumkarbonát 2,0 súly% víz q.s. ad 100,0 súly% A táptalaj pH -értéke 7,2. Előnyösen alkalmazhatjuk az alábbi összetételű táptalajt is: 5 hídról (szárazanyag-tartalom legalább 65 súly%, nyers súlyra vonatkoztatott redukált anyag tartalom legalább 50 súly%, nátriumklorid-tartalom legfeljebb 6%) 15,0súly% 10 fehéije-vitamin koncentrátum (nedvességtartalom 7-12%, hamu-tartalom 8-10%, amin-nitrogén tartalom 0,3- 0,4%, szárazanyag-tartalomra vonatkoztatott vitamin-tartalom 1%) 1,3 súly% 15 kukoricalekvár (szárazanyagtartalom legalább 48%, hamu-tartalom a szárazanyagra vonatkoztatva 20%, amin-nitrogén-tartalom 1,0—2/)%, pH érték 4,0) 1,5 súly% 20 ammóniumnitrát 2,5 súly% kalciumkarbonát 2,0 súly% víz q. s. ad 100,0 súly% A táptalaj pH-értéke 7,2. A találmány szerint az inozint a következőképpen 25 állítjuk elő: Termelő törzsként a Bacillus subtilis GEN-265 törzsből ultraibolya besugárzással kialakított Bacillus subtilis CMPM B-1321 törzset alkalmazzuk. A fermentációhoz szükséges oltóanyag kialakítása során a 50 törzset Hottinger-féle ferde agar-tenyészeten vagy hús-pepton-agaron tenyésztjük, majd a tenyészetet a következő összetételű táptalajon tenyésztjük tovább: technikai glükózz 2,0 súly% fehéije-vitamin koncentrátum 2,0 súly% 35 nátriumklorid 0,25 súly% víz q. s. ad 100,0 súly% Az így kialakított oltóanyagot 4-6 térfogat% mennyiségben az inozintermelő táptaljhoz adjuk. Inozintermelő fermentációs közegként előnyösen a 40 következő összetételű táptalajt használjuk fel: technikai glükóz vagy cukor 10,0 súly% fehéije-vitamin koncentrátum 2,0 súly% magnéziumklorid 0,5 súly% ammóniumnitrát 2,0 súly% 45 kalciumkarbonát 2,0 súly% víz q.s. ad 100,0 súly% A táptalaj pH-ja 7,2. Inozintermelő fermentációs közegként a követke- CQ ző összetételű táptalajt is előnyösen alkalmazhatjuk: 15,0súly% 1,3 súly% 1.5 súly% 2.5 súly% 2,0 súly% q.s. ad 100,0 súly% hídról fehéije-vitamin koncentrátum kukoricalekvár ammóniumnitrát 55 kalciumkarbonát víz A táptalaj pH-ja 7,2. Az inozintermelő fermentációs közeget 30 percig 115-116 C°-on sterilizáljuk. 60 A fermentációt 65-120 órán át 30-31 C°-on, levegőztetés és erélyes keverés közben végezzük. A fermentáció végén a közeg 10-12 g/1 inozint tartalmaz. A fermentációs folyamat lezajlása után a képző- 55 dött biomasszát centrifugálással eltávolítjuk, majd a sejtmentesített folyékony közegből önmagában ismert módon elkülönítjük az inozint. 2
