175190. lajstromszámú szabadalom • Eljárás inozin előállítására
5 175190 6 A találmány szerinti eljárással tehát fokozhatjuk az inozintermelő folyamat termelékenységét, azaz növelhetjük a végtermék hozamát és ugyanakkor csökkenthetjük a fermentáció időtartamát. E kedvező eredményeket úgy érjük el, hogy a fermentáció során 5 termelő törzsként a Bacillus subtiíis GEN-265 törzsből kialakított, az alaptörzstől azonban a telepek morfológiája és az inozintermelő aktivitás tekintetében egyaránt eltérő új mutáns törzset, nevezetesen a Bacillus subtiíis CMPM B-1321 törzset alkalmazzuk, és a fermentációt új összetételű táptalajon végezzük. Az új törzs fermentációs ideje 65-120 óra, azaz lényegesen rövidebb az ismert törzsénél, ami egyben a fermentációs berendezések termelőkapacitásának fokozását is lehetővé teszi. Ha a fermentációt Bacillus subtiíis CMPM B-1321 törzs alkalmazásával végezzük, a fermentáció befejezésekor a közegben 10-12 g/1 inozin halmozódik fel. Ennek megfelelően az inozinszintézis átlagos napi sebessége (a fermentáció körülményeitől és az alkalmazott táptalaj összetételétől függően) 2,0 g/1 és 4,1 g/1 közötti érték. A találmány szerinti eljárást az oltalmi kör korlátozása nélkül az alábbi példákban részletesen ismertetjük. 25 spektrofotométeren felvéve) a Reanal cég kontrollként alkalmazott inozin termékének megfelelő értékeivel összehasonlítva a kapott inozin a kontroll anyaggal azonos volt. 2. példa Az 1. példában ismertetett módon járunk el, azzal a különbséggel, hogy az inozin előállításához a következő összetételű fermentációs közeget használjuk fel; 10 technikai glükóz 10,0 súly7 fehérje-vitamin koncentrátum 2,0 súly7 magnéziumklorid 0,5 súly?' ammóniumnitrát 2,0 sül y 7 kalciumkarbonát 2,0 súly% 15 víz q.sad 100/0 súly% A fermentációs közeg pH-értéke 7,2. A fermentációt 750 ml űrtalartalmú Erlenmeyerlombikokban végezzük. Minden egyes lombikba 30 ml közeget töltünk. A lombikokat rázógépre szerel- 20 jük, és 30-31 C°-on 220-250 fordulat/perc sebességgel rázzuk. 120 órás fermentáció után a rendszer 11-12 g/1 inozint tartalmaz. 3. példa 1. példa Bacillus subtiíis CMPMB-1321 törzs Hottinger-féle ferde agaron képezett tenyészetét a következő össze tételű táptalajhoz adjuk: technikai glükóz 2,0 súly% fehéije-vitamin koncentrátum 2,0 súly% nátriumklorid 0,25 súly% víz q.s. ad 100,0 súly% Az oltótenyészetet 750 ml űrtartalmú lombikokba osztjuk szét (egy-egy lombikba 150-150 ml tenyészetet töltünk), és a tenyészetet 15-24 órán át 28-30 C°-on, 220-250 fordulat/perc sebességű rázás közben kifejlesztjük. Az így kapott oltóanyagot 4-6 térfogat% mennyiségben a következő összetételű fermentációs közeghez adjuk: technikai glükóz 10,0 súly% fehérje-vitamin koncentrátum 2,0 súly% ammóniumnitrát 2,0 súly% kalciumkarbonát 2,0 súly% víz q.s. ad 100,0 súly% A fermentációs közeg pH-értéke 7,2. A glükózt (40%-os vizes oldat formájában) és a kalciumkarbonátot a fermentációs közeg egyéb komponenseitől elkülönítetten 30 percig 111 C°-on sterilizáljuk. A fermentációt 30 liter űrtartalmú fém-fermentorokban, 30-31 C°-on, erélyes (400-500 fordulat/perc sebességű) keverés közben végezzük. A fermentáció során a rendszert 1 térfogatrész levegő/1 térfogatrész táptalaj arányban levegőztetjük. A rendszer 65 órás fermentáció után 11 g/1 inozint tartalmaz. Az inozint önmagában ismert módon különítjük el. A kapott inozin papírkromatográfiás (Whatman papír 1), és vékonyrétegkromatográfiás („Silufor’ lapot, fluoreszkáló indikátort és különböző oldószerrendszereket alkalmazva) módon meghatározott Rfért ékeit, valamint 200-300 mm-en savas, lúgos és semleges közegben meghatározott UV-abszorpciós színképeit (Perkin Elmer 202 és Pyl. Unikums P 1800 Az 1. példában ismertetett módon járunk el, azzal a különbséggel, hogy az inozin előállításához a következő összetételű fermentációs közeget használjuk fel: hídról 15,0 súly% fehéije-vitamin koncentrátum 1,3 súly% kukoricalekvár 1,5 súly% ammóniumnitrát 2,5 súly% kalciumkarbonát 2,0 súly%> víz q.s.ad 100,0 súly% 35 A fermentációs közeg pH-értéke 7,2. A fermentációt a 2. példában ismertetett körülmények között hajtjuk végre. 96-120 órás fermentáció után a közeg 10-12 g/1 inozint tartalmaz. 40 4. példa Az 1. példában ismertetett módon járunk el, azzal a különbséggel, hogy az inozin előállításához a következő összetételű fermentációs közeget használjuk fel: 45 szacharóz 10,0 súly% fehéije-vitamin koncentrátum 2,0 súly% ammóniumnitrát 2,0 súly% kalciumkarbonát 2,0 súly% víz q.s. ad 100,0 súly% 50 A fermentációs közeg pH-értéke 7,2. A fermentációt a 2. példában ismertetett körülmények között hajtjuk végre. 120 órás fermentáció után a rendszer 10 g/1 inozint tartalmaz. 55 SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás inozin előállítására egy Bacillus substilis& 'törzsnek szén- és nitrogénforrást, valamint ásványi sókat tartalmazó táptalajon levegőztetés közben végzett tenyésztése, a képződött biomassza elválasztása és a végterméknek a folyadékfázisból történő elkülönítése útján, azzal jellemezve, hogy termelő törzsként 65 CMPM B—1321 számon az ipari mikroorganizmusok összoroszországi genetikai és szelekciós kutatóintézetének törzsgyűjteményében 1976. május 6-án) letétbe 3
