175176. lajstromszámú szabadalom • Eljárás aminoglikozid-tipusú g-52 antibiotikumot és sziszomicint tartalmazó komplek és összetevői előállítására
3 175176 4 A Micromonospora zionensis mintáját deponáltuk a Northern Utilization Research and Development Division, U.S. Department of Agriculture, Peoria, Illinois törzsgyűjteményoen, ahol a besoroláskor az új mikroorganizmus-törzs a NRRL 5466 jelzést kapta. A mikroorganizmus makroszkopikus, mikroszkopikus és biokémiai tulajdonságai a következők: Taxonómiai jellegzetességek (a) 3 % A tipusu NZ amint (Sheffield Chemical Co., Norwich, New York kazeinből pankreászos feltárással készült pepton), 1 % glükózt és 1,5 % agart tartalmazó táptalajon 24-26 C°-on inkubált 30 napos mikroorganizmus tenyészetet makroszkóposán megfigyelve légmicélium nélküli, diffundáló pigment nélküli, g3cc krémszínű, világos szürkéssárgásbama 79 szinjelzésű, meglehetősen jó növekedés látható. (b) Élesztőkivonat-szacharóz táptalajon 60 napi inkubálás után mikroszkópon megfigyelve a mikroorganizmust rövid spóratartókon 1,0-1,5 pm átmérőjű, kerek-gömbalakú, bőségesen keletkezett spórák láthatók. A mikroorganizmus leírásában fentebb és a következőkben kétféle szinjelzést használunk. Az első jelzetet a Container Corporation of America (U.S.A.) által közzétett „Color Harmony Manual,, 1958, 4. kiadásából és az első szinelnevezést az ugyancsak a Container Corporation of America által 1950/ben kiadott, Taylor, Knoche és Granville: „Descriptive Color Name Dictionary,,-ból vettük. A másik szinelnevezés az elsőnek szinonimja vagy majdnem szinonimja, és ezt a National Bureau of Standards Circular No. 553 (1955) U.S.A. kiadványból vettük. Tenyészési jellegzetességek 1. A micromonospora zionensis 28-37 C°-on általában jól fejlődik, 45 C°-on vagy ennél magasabb hőmérsékleten már nem növekszik. A mikroorganizmus aerób, és 6,5 és 8,3 közötti pH-nál jól tenyészik, de legjobban a közömbös kémhatást megközelítő pH-nál fejlődik és termel. 2. A mikroorganizmus a következő szokványos táptalajokon nem tenyészik: Czapek-glükóz, glükóz-aszparagin, kalciummalát, közönséges agar (vizes agar), tápanyagot tartalmazó agar, tojásagar (Dorset-tojástáptalaj), zselatin, keményítő és cellulóz. 3. Burgonyaszeleten a növekedése gyenge, világos vörösesbarna; ha kalciumkarbonátot viszünk a burgonyára, a növekedés jó, redős, fekete. 4. Löffler-szérumon a növekedés elég jó, krémszínű, a szubsztrátum elfolyósodik. 5. Pepton-glükóz agaron a növekedés elég jó, hártyás, légmicélium nincs, diffundáló pigment nincs, g3ic világos borostyánkőszín; szötét narancssárga 72. 6. Lakmusztej: peptonizál savas reakciót adva. 7. Tirozin táptalajon a növekedés gyenge, nem termel tirozinázt. 8. Szénhidrát-hasznosítás: a mikroorganizmus jól növekedik D-arabinózon, L-arabinózon, D-galaktózon, D-glükózon, mannózon, szacharózon, D- xilózon és keményítőn; a növekedés elég jó D-laktózon, D-levulózon és D-ribózon; a növekedés gyenge dulciton, glicerinen, L-inoziton, D-manniton, melibiózon, melecitózon, raffinózon, L-ramnózon, szorbiton és szalicinon. A cellulózt nagyon lassan bontja el. A kontroll táptalaj hozzáadott szénhidrát nélkül 0,5 % élesztőkivonatot tartalmaz. Ezen a táptalajon a mikroorganizmus gyengén növekszik, ezért a mikroorganizmus tenyésztési jellemzőinek minden javulása a hozzáadott 1 % szénhidrát hasznosításának tulajdonítható. 9. Nitrogén-hasznosítás: Ezeket az adatokat egyetlen nitrogénforrást és 1 % glükózt tartalmazó táptalajon kaptuk. , (a) 0,5 % élesztőkivonaton a növekedés jó, hártyás, légmicélium nincs, diffundáló pigment nincs, színe: g4ng világosbarna : erősen barna 5 5. (b) 1,0 % A tipusu NZ aminon a növekedés elég jó, lapos, légmicélium nincs, diffundáló pigment nincs, g3ca gyöngyházrózsaszin ; halvány narancssárga 73. (c) 1,0 % aszparaginon a növekedés gyenge, lapos, légmicélium nincs, diffundáló pingment nincs, g6ng téglavörös; mérsékelten vörösesbarna 43. (d) 1,0 % glutaminsavon a növekedés és a szin ugyanaz, mint a (c) pontban. (e) 1,0 % nátriumnitráton látható növekedés nincs. (f) 1,0 % ammóniumnitráton látható növekedés nincs. 10. Sótűrés: A mikroorganizmus a táptalajban legfeljebb 3 % nátriumkloridot visel el. 11. Bennett-agaron a növekedés jó, redős-hártyás, légmicélium nincs, diffundáló pigment nincs, fekete. 12. Emerson-agaron a növekedés elég jó, redős, légmicélium nincs, diffundáló pigment nincs, fekete. 13. Glükóz-élesztőkivonat-agaron a növekedés jó, redős, légmicélium nincs, diffundáló pigment nincs, g6ni vakondbama: szürkésvörösesbama 46. 14. Czapek-agaron a növekedés gyenge. 15. Tirozin agaron a növekedés nagyon gyenge: tirozin-húskivonat-agaron nem termel tirozinázt, növekedése elég jó; tirozin-élesztőkivonat-agaron tirozinázt termel (kristályok oldódnak), világosbarna diffundáló pigment keletkezik. A megfigyeléseket a 2., 7. és 14. napokon végeztük (lásd Gordon és Smith, J. Bact..69, 147). 16. Pepton-vas-agaron a növekedés jó, kénhidrogén nem fejlődik 17. Velő-szívfőzet-agaron a növekedés meglehetősen jó, redős, hártyás, légmicélium nincs, diffundáló pigment nincs, g3Le, juharsárga: erősen sárgásbarna 74. 18. Malátakivonat-A-agaron a növekedés jó redős, hártyás, légmicélium nincs, diffundáló pigment nincs, g5pg rozsdabarna: erős barna 55. 19. Malátakivonat-B-agaron a növekedés jó, hártyás, légmicélium nincs, diffundáló pigment nincs, g4Lg világos fahéjbarna: mérsékelten barna 58. A fenti tenyésztési jellegzetességek alapján a Micromonospora zionensist minden más eddig leírt mikroorganizmustól megkülönböztethetjük. Ezenkívül a Micromonospora zionensis abban is különbözik, hogy az aerób fermentálás körülményei között G-52 antibiotikumot és sziszomicint tartalmazó új, antibiotikusan hatékony anyagot termel. A találmány tárgya eljárás antibiotikusan hatékony termék előállítására, tehát a Micromonospora zionensis faj vizes táptalajban aerób körülmények 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
