175158. lajstromszámú szabadalom • Eljárás naftacénszármazékok előállítására
35 175158 36 maradékot 35 liter hexánhoz hozzáadva a vegyidet kiválik. A csapadékot szűrőn szívatással elválasztva, mosva és szárítva, 52 g nyers 32 999 RP-t kapunk. C - Tisztítás a) A 8. példa B szakaszában kapott 50 g nyers 32 999 RP-hidrokloridot 130 ml vízben szuszpendálunk, hozzáadunk 520 ml dioxánt, és a kapott oldatot szűrjük. A szüredékből a 32 999 RP-hidrokloridot 20° körüli hőmérsékleten 4 liter dioxán hozzáadásával kristályosítjuk ki. A kristályokat szűrőn szívatással elválasztva, dioxánnal mosva és szárítva, 27 g, félig tiszta 32 999 RP-hidrokloridot kapunk. b) A 8. példa B szakasza szerint kapott 4,2 g nyers hidrokloridot 0,2 liter vízben feloldjuk, és az oldat pH-ját 10 n nátriumkarbonát-oldattal 4,5-re állítjuk be. Az oldatban levő antibiotikumot 0,4 liter Amberlite IRC 50 gyantát savas alakban tartalmazó oszlopon kötjük meg. Az oszlopot egymás után 1 liter vízzel, 2 liter 50%-os, vizes metanollal, 2 liter 90%-os vizes metanollal és végül 1% nátriumkarbonátot tartalmazó 3 liter 90%-os, vizes metanollal mossuk. Az eluátumot 5—10 Torr nyomáson, 40°-on 0,5 literre bepároljuk, és a bepárlási maradék pH-ját 11 n nátriumkarbonát-oldattal 10-re állítjuk be, majd 0,5-0,5 liter kloroformmal kétszer és 0,5-0,5 liter 80 : 20 térfogatarányú kloroform-n-butanol eleggyel kétszer extraháljuk. A szerves kivonatokat egyesítve 40°-on 5—10 Torr nyomáson bepároljuk. A bepárlás folyamán az oldathoz hozzáadunk 1 térfogatszázalék 11 n sósavat, és 5 térfogatszázalék vizet tartalmazó 10 ml n-butanolt. A 30 ml-re bepárolt maradékot lassan 500 ml hexánba öntjük. A kivált csapadékot szűrőn szívatással elválasztva, mosva és szárítva, 1,26 g félig tiszta 32 999 RP-hidrokloridot kapunk. Az a) szakaszban kapott 27 g, félig tiszta terméket 300 ml vízben feloldjuk, és az oldatot megszűrjük. A szüredékhez 20° körül 2,7 liter acetont adva, a 32 999 RP-hidroklorid kikristályosodik. A kristályokat szűrőn szivatással elválasztva, mosva és szárítva 17 g tiszta 32 999 RP-hidrokloridot kapunk. 9. példa A 8. példa A szakasza szerint 30 óra hosszat inkubált Corynebacterium simplex (ATCC 6946) törzs 50 ml tenyészetét 0°-on sterilen centrifugáljuk, majd a sejteket 50 ml 7,5 pH-jű 1/15 mólos foszfát-pufferoldatban újra szuszpendáljuk. A sejteket ekkor 0° körül 15 percig 25 kHz erősségű ultrahang hatásának tesszük ki. A centrifugálás után a felülúszó folyadékhoz 10 mg karminomicin-hidrokloridot adunk, és az így kapott oldatot az 1. példa szerinti körülmények között inkubáljuk. 40 óra elteltével a karminomicin 60%-os kitermeléssel 32 999 RP jelű vegyületté redukálódik. A 8. példa A szakasza szerint 30 óra hosszat inkubált Corynebacterium simplex (ATCC 6946) törzs 50 ml tenyészetét 0°-on sterilen centrifugáljuk, majd a sejteket 50 ml 8,1 pH-jú 1/5 mólos trisz(hidroximetil)-aminometán-hidroklorid-pufferoldatban újra szuszpendáljuk, és a szuszpenziót 300 ml-es Erlenmeyer-lombikba visszük át. Hozzáadunk 25 mg EDTA-t (etiléndiamin-tetraecetsavat), 25 mg cetiltrimetilammóniumbromidot és 200 mg lizozimet, majd a lombik tartalmát 37°-on 1 óra hosszat forgóasztalon 220 fordulattal keverjük. Centrifugálás után a felülúszó folyadékhoz 5 mg karminomicin-hidrokloridot adunk, az 1. példa szerinti körülmények között 40 óra alatt, és az így kapott oldatot közel 30%-os kitermeléssel 32 999 RP-vé redukáljuk. 10. példa 11. példa A következő összetételű folyékony A táptalajt állítjuk elő: szójaliszt 8 g, sütőipari élesztő 40 g, tiszta tejcukor 58 g, nátriumklorid 2 g, monokáliumfoszfát 1 g, magnéziumszulfát-heptahidrát 0,1 g, vas(II)szulfát-heptahidrát 0,1 g, cinkszulfát-heptahidrát 0,1 g, 75°-os desztillált vízzel 800 ml-re kiegészítve. A szuszpenzió pH-ját Imi 10n nátriumkarbonát-oldattal 6,5-re állítjuk be, majd a következő anyagokat adjuk hozzá: glicerin (1,26 fajsúlyú) 19 g, kalciumkarbonát 2 g, desztillált vízzel 1000 ml-re kiegészítve. Ezt a folyékony táptalajt 50-50 ml-enként 300-300 ml-es lombikokba osztjuk szét, és a lombikokat 20 percig 122°-on sterilizáljuk. Lehűlés után az A folyékony táptalaj pH-ja 5,9. Ettől függetlenül 10mg/ml koncentrációjú és 9,0 pH-jú steril szulfanilamid-oldatot készítünk úgy, hogy 5 n nátriumkarbonát-oldattal és desztillált víz elegyében szulfanilamidot feloldjuk, és az oldatot 0,45 mikron pórusméretű „Millipore” membránon megszűrjük. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 18
