175158. lajstromszámú szabadalom • Eljárás naftacénszármazékok előállítására
33 175158 34 beoltjuk. A tenyészeteket forgó asztalon percenként 220 fordulattal keverve, 48 óra hosszat 30 °-on inkubáljuk, majd a tenyésztés folyamán keletkezett sejteket elválasztjuk. A karminomicint 32 999 RP jelű antibiotikummá olyan 50 ml 1/15 mólos, 8,0 pH-jú foszfát-pufferoldattal készült sejtszuszpenzióval redukáljuk, amely 1 ml 10mg/ml karminomicin-hidroklorid vizes oldatot tartalmaz, és így a karminomicin koncentrációja végül 0,2 g/liter. A redukciót forgóasztalon percenként 220 fordulattal való keverés közben 26°-on, 48 óra hosszat hajtjuk végre. A sejtszuszpenziót az 1. példa szerint dolgozzuk fel. A 32 999 RP kitermelése a felhasznált karminomicinre vonatkoztatva 57%. 7. példa A beoltást Corynebacterium simplex (ATCC 6946) törzs Erlenmeyer-lombikban kevert 250 ml tenyészetével végezzük. A tenyészetet keverés és steril levegővel való levegőztetés közben 30°-on 5 32 óra hosszat inkubáljuk, a fermentlé ekkor alkalmas a termelő tenyészet beoltására. A termelő tenyésztést 800 literes fermentálóberendezésben végezzük, amely a következő komponenseket tartalmazza: 10 por alakú sörélesztő autolizátum 6 kg, monokáliumfoszfát 1 kg, 15 dikáliumfoszfát 1 kg, csapvízzel feltöltve 355 literre. A 6. példa szerint előállított C folyékony táptalajt 50—50 ml-enként 300-300 ml-es lombikokba osztjuk szét. Az 50 ml, 6,9 pH-jú folyékony táptalajt tartalmazó lombikokat a Streptomyces lavendulae (ATCC 8664) törzs 2,5 ml-nyi tenyészetével beoltjuk, és a tenyészeteket forgóasztalon percenként 220 fordulattal keverve, 26°-on 40 óra hosszat inkubáljuk. Ezután mindegyik, 7,50 pH-jú teljes tenyészetet tartalmazó lombikhoz 1-1 ml 10mg/ml karminomicin-hidroklorid vizes oldatot adunk, és 0,2 g/liter karminomicin koncentrációt kapunk. A redukciót az előző példákkal azonos keverés közben és hőmérsékleten 4 napon át folytatjuk. A lombikok tartalmát az 1. példa szerint dolgozzuk fel. A 32 999 RP jelű vegyület kitermelése a felhasznált karminomicin mennyiségére vonatkoztatva 61%. 8. példa A - Fermentálás Miután a folyékony táptalaj pH-ját 460 ml 10 n 20 nátriumkarbonát-oldattal 7,0-re állítottuk be, a sterilizáláshoz 40 percig 122°-os vízgőzt buborékoltatunk át táptalajon. A sterilizálás folyamán vizgőz kondenzál, a folyékony táptalaj térfogata lehűlés után 385 liter, ekkor 6 kg glükóz-monohidrátot tar- 25 talmazó 15 liter steril vizes oldattal a térfogatot 400 literre egészítjük ki. Ezt a 6,8 pH-jú folyékony táptalajt a fenti 170 literes fermentálóban levő tenyészet 40 literével 30 beoltjuk. A tenyészetet percenként 160 fordulatú turbinával keverve és óránként 20 m3 steril levegővel levegőztetve, 30°-on 30 óra hosszat inkubáljuk. Ekkor a tenyészet a karminomicin biokémiai úton 32 999 RP jelű vegyületté való átalakítására alkal- 35 más. A tenyészethez 40 g karminomicin-hidrokloridot tartalmazó 4 liter vizes oldatot adunk. Az inkubálást a fenti keverési és levegőztetési körülmények között 26°-on 17 óra hosszat végez- 40 zük. A karminomicin közel 100%-os kitermeléssel redukálódik 32 999 RP jelű antibiotikummá. B - Extrahálás 170 literes fermentálóberendezésbe a következő alkotórészeket töltjük: pepton húskivonat élesztőkivonat 600 g, 600 g, 600 g, glükóz-monohidrát 600 g, csapvízzel 110 literre feltöltve. 45 50 55 Miután a pH-t 40 ml 10 n nátriumkarbonát-oldattal 6,8-ra beállítottuk, még hozzáadunk 300 g kalciumkarbonátot. A folyékony táptalaj pH-ja ekkor 6,8 körül van, 60 a sterilizálást úgy végezzük, hogy 40 percig 122°-os vízgőzt buborékoltatunk át az oldaton lehűlés után a vízgőz kondenzálása következtében a térfogat 120 liter, és a pH 8,3. A pH-t 90 ml 12 n sósavval 7,0-re állítjuk be. 6S A 8. példa A szakasza szerint kapott 420 liter fermentléhez 42 liter n-butanolt és 2,9 liter 6 n nátriumkarbonát-oldatot adunk. A hatóanyagot két centrifugán ellenáramban 60 térfogatszázalék n-butanollal extraháljuk. A kivonat térfogata 330 liter, ezt 5—10 Torr nyomáson 40 °-on 20 literre bepároljuk. A 20 literre bepárolt kivonathoz 20 liter metilénkloridot adunk, és a kapott keveréket nátriumkarbonáttal 10 pH-ra beállított 10 liter vízzel mossuk. A 32 999 jelű RP-t tartalmazó mosófolyadékot 80 : 20 térfogatarányú metilénklorid-n-butanol eleggyel extraháljuk. A három szerves kivonatot egyesítjük, és 5—10 Torr nyomáson 15 literre bepároljuk. A 15 liter bepárlási maradékhoz keverés közben hozzáadunk 0,2 liter 90 : 10 térfogatarányú n-butanol-11 n sósav elegyet, majd 5—10 Torr nyomáson 5 literre bepároljuk. A bepárlási maradék a 32 999 RP jelű antibiotikumot hidroklorid alakban tartalmazza, ezt a 17
