175158. lajstromszámú szabadalom • Eljárás naftacénszármazékok előállítására
31 175158 32 Táptalaj Kitermelés A 80%, B 60%. 3. példa Az 1. példa szerinti módon a Corynebacterium simplex (ATCC 6946) törzs tenyészetét A folyékony táptalajon 300 ml-es lombikokban állítjuk elő. A tenyészeteket percenként 220 fordulattal való keverés közben 30 -on inkubáljuk. 30 órai inkubálás után 5 lombik tartalmát képező 250 ml fermentlevet egyesítünk, és a sejteket centrifugálással elválasztjuk. Az összegyűjtött sejtek összességét 50 ml 1/15 mólos 8,0 pH-jú foszfát-pufferoldatot tartalmazó 300 ml-es lombikban szuszpendáljuk. Ugyanilyen módon egy másik sejtszuszpenziót is készítünk, de ebben az esetben a szuszpendáláshoz 50 ml 1/15 mólos 5,0 pH-jú foszfát-pufferoldatot használunk. Mindegyik lombikba ml-enként 4 mg karminomicin-hidrokloridot tartalmazó 2,5 ml vizes oldatot adunk, és így a koncentráció 0,2 g/liter karmomicin. A lombikokat az 1. példa szerint 48 óra hosszat inkubáljuk, és a lombikok tartalmát az 1. példa szerint dolgozzuk fel. A 32 999 RP antibiotikum kitermelése a használt karminomicin mennyiségére vonatkoztatva a következő: pH Kitermelés 8,0 90%, 5,0 60%. 4. példa Az 1. példa szerint 6,9 pH-jú folyékony A táptalajt készítünk, és 50—50 ml mennyiségben 300 ml-es lombikokba töltjük. A lombikokban a 6,8 pH-jú folyékony táptalajhoz hozzáadjuk 2,5—2,5 ml Bacillus cyélooxidans (ATCC 12 673) törzs tenyészetét, és a lombikokat forgó asztalon percenként 220 fordulattal való keverés közben 30°-on inkubáljuk. A karminomicin redukcióját úgy hajtjuk végre, hogy a) a 7,65 pH-jú teljes tenyészetet használjuk fel, vagy b) a 3. példa szerinti körülmények között 8,0 pH-jú pufferoldatban előállított sejtszuszpenziót alkalmazunk a redukcióhoz. Mindegyik lombikba lOmg/ml koncentrációjú 1 ml vizes karminomicin oldatot adunk, így 0,2 g/liter karminomicin koncentrációt kapunk. A redukciót 4 napon át 26°-on, forgó asztalon percenként 220 fordulattal való keverés közben hajtjuk végre. A lombikok tartalmát az 1. példa szerint dolgozzuk fel. A 32 999 RP kitermelése az alkalmazott karminomicin mennyiségére vonatkoztatva a következő: Redukáló közeg Kitermelés teljes tenyészet 94%, elkülönített sejtek 75%. 5. példa A Bacillus cyclooxidans (ATCC 12 673) törzs tenyészetét az A folyékony táptalajban a 4. példa szerint állítjuk elő. A 48 óra hosszat inkubált, 7,65 pH-jú teljes tenyészethez a karminomicint a következő alakban adjuk hozzá: a) lombikonként 1—1 ml, 10mg/ml koncentrációjú tiszta termék vizes oldataként (literenként 0,2 g karminomicin), b) lombikonként 4-4 ml, 10mg/ml koncentrációjú, 16% karminomicint tartalmazó nyers termékként (literenként 0,13 g karminomicin). A lombikokat az 1. példa szerinti körülmények között inkubáljuk és dolgozzuk fel. A 32 999 RP kitermelése a felhasznált karminomicinre vonatkoztatva a következő: Termék Kitermelés tiszta karminomicin 94%, nyers karminomicin 92%. 6. példa A következő összetételű folyékony C táptalajt állítjuk elő: szójaliszt 30 g/liter szójaolaj (fajsúlya 0,92) 4,6 g/liter monokáliumfoszfát 1 g/liter kalciumkarbonát 2,5 g/liter vízmentes glükóz 50 g/liter. Ezeket az alkotórészeket a glükóz kivételével 900 ml desztillált vízben feloldjuk vagy szuszpendáljuk. A kapott szuszpenzió pH-ját n nátriumkarbonát-oldattal 7,20-ra állítjuk be, majd 45—45 ml-enként 300—300 ml-es lombikokba osztjuk szét. A lombikokat 20 percig 122°-on sterilizáljuk, majd lehűtjük. Mindegyik lombikhoz steril körülmények között 5-5 ml 500 g/liter koncentrációjú steril glükózoldatot adunk. A beoltásra kész folyékony táptalaj pH-ja 7,0. A 300 ml-es lombikban levő 50 ml, 7,0 pH-jú folyékony táptalajt a Streptomyces roseochromogenes (ATCC 13 400) törzs 2,5 ml-nyi tenyészetével 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 16
