175158. lajstromszámú szabadalom • Eljárás naftacénszármazékok előállítására
29 175158 30 Ehrlich-féle ascites tumor elleni hatás: Adag Hatékonyság 0,25 146% 0,15 141% AD, so =~ 0,10 0. 07 168% A következő példák szemléltetik a találmány szerinti eljárást, de hatályát semmiképpen nem korlátozzák. A hőmérsékleti adatokat Celsius-fokban adjuk meg. A példákban a) a 32 999 RP jelű vegyidet azonosítását kovasavgélen vékonyrétegkromatografálással végezzük úgy, hogy a kapott termék Rf-értékeit az ugyanabban az oldószerben karminomicinnel vagy az analitikailag tiszta 32 999 RP jelű vegyülettel kapott Rf-értékekkel hasonlítottuk össze, b) a 32 999 RP jelű vegyület-kitermelést a vékonyrétegkromatogramokból határozzuk meg úgy, hogy a kivonat megfelelő foltjainak intenzitását összehasonlítjuk a vonatkozási anyagként használt tiszta 32 999 RP jelű vegyület foltjának intenzitásával, vagy oly módon, hogy a „Chromoscan” lemez-leolvasójánál regisztrált csúcsok felületeit hasonlítjuk össze, vagy úgy, hogy a keresett termék foltjának helyén a kromatográfiás lemezről leoldott 32 999 RP jelű vegyületet kolorimetriásan mennyiségileg határozzuk meg. 1. példa Folyékony A táptalajt készítünk a következő összetétellel: Por alakú sörélesztő autolizátum 15 g/liter monokáliumfoszfát 2,5 g/liter dikáliumfoszfát 2,5 g/liter vízmentes glükóz 15 g/liter. Az első három alkotórészt 1000 ml desztillált vízben feloldjuk, és az oldathoz a 6,9 pH eléréséig n nátriumkarbonát-oldatot adunk, majd 300 ml-es lombikokban 50-50 ml-enként szétosztjuk. A lombikokat 20 percig 122°-on sterilizáljuk, majd lehűtjük, és mindegyik lombik tartalmát 1,5 ml steril 500 g/liter koncentrációjú glükóz-oldattal sterilen kiegészítjük. Ekkor a folyékony táptalaj pH-ja 7,05. Lombikonként a Corynebacterium simplex (ATCC 6946) törzs 2,5 ml-nyi tenyészetét hozzáadva, 80 lombikot beoltunk, és a lombikokat percenként 220 fordulattal keverve 30°-on inkubáljuk. A tenyészet 48 óra alatt jól kifejlődik, és pH-ja ekkor 7,70. Minden lombikhoz 2,5 ml, 10 mg/ml koncentrációjú vizes karminomicin-oldatot adunk, és a redukciót percenként 220 fordulattal való keverés közben 26-on hajtjuk végre. A redukció 48 óra alatt befejeződik, és a táptalaj pH-ja ekkor 8,5. A 80 lombik tartalmát egyesítjük, és homogenizáljuk, majd 50-50 ml térfogatú fermentléhez 25—25 ml borát-pufferoldatot adunk, hogy pH-ját 9,0-ra állítsuk be, és 50-50 ml 70 : 30 térfogatarányú metilénklorid-n-butanol eleggyel kétszer extraháljuk. A szerves kivonatokat vízmentes nátriumszulfáton szárítjuk. A 32 999 RP vegyület kitermelését a szerves kivonatoknak kovasavgélen vékonyrétegkromatografálásával határozzuk meg. A vékonyréteglemezekre felvitt kivonatok térfogata 10-20/diter. Hogy a karminomicin és a 32 999 RP jelű vegyület jó elválasztását biztosítsuk, a lemezeket 80 :17 : 3 térfogatarányú metilénklorid-hangyasav-metanol oldószereleggyel fejlesztjük ki. A kapott termékek Rfértékeit az ugyanilyen körülmények között kromatografált vonatkozási anyagok Rf értékeivel hasonlítjuk össze. A 32 999 RP jelű vegyület mennyiségi meghatározása azt mutatja, hogy a Corynebacterium simplex (ATCC 6946) tenyészete a karminomicint 80%-os kitermeléssel (az alkalmazott karminomicin mennyiségére vonatkoztatva) redukálja 32 999 RP vegyületté. 2. példa Az 1. példa szerint előállított A fermentlevet 300—300 ml-es lombikokba szétosztjuk. Ugyancsak 300 ml-es lombikokba osztjuk szét a következő összetételű B táptalajt: pepton io g húskivonat 5 g glükóz 10 g desztillált vízzel feltöltve 1000 ml-re. A pH-t n nátriumkarbonát-oldattal 7,2-re állítjuk be, és a folyékony táptalajt 122°-on 20 percig sterilizáljuk. 50 ml 7,05 pH-jú A folyékony táptalajt tartalmazó lombikot és 50 ml 6,5 pH-jú B folyékony táptalajt tartalmazó lombikot a Corynebacterium simplex (ATCC 6946) törzs 2,5 ml tenyészetével beoltunk. A tenyészeteket percenként 220 fordulattal keverve, 30°-on inkubáljuk. Megfelelő tenyésztési idő után (ez az időtartam az A közeg esetén 48 óra, és a B közeg esetén 72 óra) lombikonként 2,5-2,5 ml, 10 mg/ml karminomicin-hidrokloridot tartalmazó vizes oldatot adunk a lombikokhoz, és a koncentráció 0,5 g/liter karminomicin. Ezután az A és B tenyészeteket percenként 220 fordulattal keverve 26°-on 2, illetve 4 napig inkubáljuk, majd a lombikok tartalmát az 1. példában leírt módon dolgozzuk fel. A felhasznált karminomicinre vonatkoztatva a 32 999 RP jelű antibiotikum kitermelése a következő: 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 50 65 15
