175152. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új amino-oxi-savakat tartalmazó, gasztrin-hatású peptidek előállítására
19 175152 20 lünk 1 órán keresztül. A szuszpenziót leszűrjük, és a csapadékot alaposan átmossuk etil-acetáttal, majd exszikkátorban szárítjuk. így 0,41 g (91%) amorf H-Met-Asp-Phe-OGly-OH • HCl-ot kapunk, =0,05, Rf =0,2, a termék kromatográfiásan kissé szennyezett. 8. lépés 2-[N-(terc-Butil-oxi-karbonil)-L-triptofil--L-metionil-L-aszparagil-L-fenil-alanil--amino-oxi]-ecetsav 3,0 g (4,79 mmól) H-Met-Asp-Phe—OGly-OH • HCl-ot (7. lépés) 50 ml DMF-ban szuszpendálunk, az elegyhez keverés közben hozzáadunk 1,4 ml (10 mmól) trietilamint és 2,35 g (5,0 mmól) BOC—Trp—OPFP-t. A reakcióelegyet másfél óra elteltével vákuumban bepároljuk, a maradékot etil-acetátban oldjuk, és kirázzuk háromszor 1 n sósav-oldattal, majd vízzel. Az etil-acetátos oldatot szárítás, derítés után vákuumban 10ml-re bepároliuk és vízmentes éterrel kicsapjuk. A szuszpenziót hidegen állni hagyjuk, majd leszűrjük. A 3,04 g nyersterméket 5 ml etanolban feloldjuk, és 200 ml éterrel kicsapjuk. így 2,17 g (58,8%) amorf és kromatográfiásan kissé szennyezett BOC-Trp—Met— Asp—Phe—OGly—OH-t kapunk, Rf =0,3, [a]D = —19,9° (c = 0,75, dimetilformamidban). 9. lépés 2- ( L-T riptofil-L-metionil-L-aszparagil-L-fenil-alanil-amino-oxi)-ecetsav 2,17 g (2,81 mmól) BOC—Trp—Met—Asp—Phe-OGly-OH-t (8. lépés) keverés közben beleszórunk 8 ml trifluorecetsav, 2 ml víz és 1 ml anizol elegyébe, és a reakcióelegyen két órán keresztül nitrogéngázt buborékoltatunk át. Az oldatot 60 ml éterrel felhígítjuk, és a kivált terméket szűrés után exszikkátorban szárítjuk. A 2,0 g trifluor-acetátot 8 ml 2 n nátrium-hidroxid-oldatban oldjuk, majd az oldat pH-ját 10%-os sósavoldattal 4-re állítjuk. A csapadékot kiszűrjük, és vízzel mossuk. így 1,34 g (71%) amorf, kromatográfiásan kissé szennyezett H—Trp—Met—Asp—Phe—OGly—OH-t kapunk, amelyet tisztítás nélkül használunk fel, Rf =0,1. 10. lépés 3- Bróm-propionsav 44,0 g (0,49 mól) ß-alanint és 200 g (1,68 mól) káliumbromidot feloldunk 1,0 liter 2,5 n kénsav-oldatban, és az oldathoz szobahőmérsékleten részletekben hozzászórunk 42,4 g (0,76 mól) nátrium-nitritet. A reakcióelegyet két órán keresztül szobahőmérsékleten keverjük, majd kétszer 200 ml éterrel kirázzuk. Az éteres oldatot vízzel háromszor mossuk, majd szárítás után vákuumban bepároljuk. A 19,8 g nyersterméket 30 ml n-hexánból derítéssel átkristályosítjuk. így 18,1 g (24%) 3-bróm-propionsavat kapunk, olvadáspont: 59—60 °C. 11. lépés 3-(terc-Butil-oxi-karbonil-amino-oxi)--propionsav-diciklohexil-ammónium-só 7,7 g (0,30 mól) fémnátriumot feloldunk 450 ml etanolban, majd az etilát-oldathoz hozzáadunk 26,6 g (0,20 mól) N-(terc-butil-oxi-karbonil)-hidroxil-amint 165 ml etanolban és 28,7 g (0,188 mól) 3-bróm-propionsavat (10. lépés) 165 ml etanolban. A reakcióelegyet 2 napig 50-55 °C-on keverjük, vákuumban bepároljuk, majd a maradékot 350 ml vízben feloldjuk. A vizes oldatot háromszor 100 ml etil-acetáttal kirázzuk, citromsavval pH-3-ra savanyítjuk, majd nátrium-kloriddal telítjük, és ötször 100 ml etil-acetáttal kirázzuk. Az egyesített etil-acetátos fázisokat vízzel háromszor mossuk, majd szárítás után vákuumban bepáröljuk. A maradék 27,25 g olajszerű anyaghoz 100 ml n-hexán alatt hűtés közben 23,3 ml (118 mmól) diciklohexil-amint adunk hozzá részletekben. A szilárd csapadékot hidegen állni hagyjuk, majd leszűrjük és éterrel mossuk. A 44,93 g súlyú (olvadáspont: 128-135 °C) nyersterméket 50 ml metanolban oldva derítjük, majd 200 ml éterrel kicsapjuk. így 25,0 g (34%) BOC-/3-OAla—OH • DCHA-sót kapunk, olvadáspont: 148-149 °C, Rf = 0,5, a sóé: Rf =0,25. Az anyalúgból további 9,3 g súlyú termék (12,8%) izolálható, olvadáspont: 144—145 °C. Elemzési eredmények a C2oH3g05N2 összegképlet (molekulasúly: 386,52) alapján: számított: C =62,14%, H = 9,91%, N = 7,25%, talált: C =61,99%, H = 10,02%, N = 7,09%. 12. lépés 3-(terc-Butil-oxi-karbonil-amino-oxi)--propionsav-(pentafluor-fenil)-észter 1,10 g (2,85 mmól) BOC-0-OAla-OH • DCHA-sót (11. lépés) megosztunk 40 ml éter és 3 ml 2 n kénsav-oldat között, az éteres fázist még egyszer kirázzuk kénsav-oldattal, majd az egyesített kénsav-oldatokat éterrel. Az egyesített éteres fázist szárítás után vákuumban bepároljuk. A kapott 0,34 g (1,66 mmól) olajszerű anyagot 0,31 g (1,8 mmól) pentafluor-fenollal együtt 10 ml vízmentes dioxánban feloldjuk, és 5 °C-on 0,37 g (1,8 mmól) DCC-t adunk az oldathoz. A reakcióelegyet másfél órán keresztül szobahőmérsékleten keverjük, a kivált DCU-t kiszűrjük, és a szűrletet vákuumban bepároljuk. A maradékot n-hexánban oldjuk és 5%-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal háromszor kirázzuk, ezután az oldatot megszárítjuk, derítjük, és vákuumban bepároljuk. Az olajszerű anyagot n-pentánnal szilárdítjuk meg. így 0,33 g (55%) (a savra számítva) BOC—ß-OAla—OPFP-t kapunk, olvadáspont: 58—59 °C, R? =0,65 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 SS 60 65 10
