175152. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új amino-oxi-savakat tartalmazó, gasztrin-hatású peptidek előállítására
17 175152 18 2. lépés N-(terc-Butil-oxi-karbonil)-L-aszparaginsav--^-(terc-butil-észter)-a-(N-hidroxi-szukcinimid-észter) 18.8 g (40 mmól) BOC-AspíO'BuKOH • DCHA-sót megosztunk 240 ml éter és 1,2 ml tömény kénsavat tartalmazó 240 ml víz között. Az éteres fázist 80 ml vízben oldott 0,4 ml tömény kénsavval, majd vízzel mossuk. Az éteres oldatot szárítás után vákuumban bepároljuk. Az így kapott 11,45 g (39,7 mmól) olajszerű BOC—Asp(0*Bu)—OH-t 4,6 g (40 mmól) N-hidroxi-szukcinimiddel együtt 100 ml vízmentes dioxánban feloldjuk. Az oldatot kifagyásig hűtjük, majd hűtés közben 8,25 g (40 mmól) DCC-t adunk hozzá. A reakcióelegyet éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük, majd kiszűrjük a kivált DCU-t, és a szűrletet bepároljuk. Az olajszerű anyagot n-hexán-diizopropil-éter eleggyel szilárdítjuk meg. A 13,8 g (olvadáspont: 98-102 °C) nyersterméket háromszoros mennyiségű izopropil-alkoholból átkrístályosítjuk. így 12,1 g (78,3%) fehér kristályos BOC—Asp(O'Bu) —OSu-t kapunk, olvadáspont: 103—105 °C, [a]D = —25,6° (c = 1,0, dioxánban). Elemzési eredmények a C17H2608N2 összegképlet (molekulasúly: 386,39) alapján: számított: C =52,84%, H =6,78%, N = 7,25%, talált: C =52,97%, H =6,90%, N = 7,21%. 3. lépés 2-( L-F enil-alanil-amino-oxi)-ecetsav-hidroklorid 5.8 g (17,1 mmól) BOC-Phe-OGly-OH-t (1. lépés) feloldunk 10 ml etil-acetátban, és 60 ml 4n sósavas etil-acetátot öntünk az oldathoz. 1 órán át tartó keverés után az olajszerü anyagról leöntjük az oldószert, majd az anyagot friss etil-acetáttal megszilárdítjuk. Az így kapott 4,53 g (96,6%) H-Phe-OGly-OH • HC1 higroszkópos, csak exszikkátorban i tárolható (olvadáspont: 75—80 °C, Rf = 0,2), kromatográfiásan egységes. 4. lépés 2-[N-(terc- B util-oxi-karb onil)- L-aszparagil-(/3-terc-butil-észter)-L-fenil-alanil-amino-oxi ]-ecet sa v 7,0 g (25,5 mmól) H-Phe-OGly-OH • HCl-ot (3. lépés) 150 ml DMF-ban feloldunk, majd az oldathoz 7,15 ml (51 mmól) trietil-amint adunk. A szuszpenzióba 9,30 g (24 mmól) BOC—Asp—(0*Bu)-OSu-t (2. lépés) szórunk, és feloldódása után a reakcióelegyet éjszakán át állni hagyjuk. Ekkor a szuszpenziót vákuumban bepároljuk, az olajos maradékot 150 ml kloroformban oldjuk, a kloroformos oldatot háromszor 1 n sósavoldattal és vízzel kirázzuk, majd szárítás után vákuumban bepároljuk. A maradékot diizopropil-éteres döntésekkel megszilárdítjuk. A 10,35 g nyersterméket kétszer átcsapjuk éter és n-hexán elegyéből, így 8,63 g (70,7%) BOC-Asp(0‘Bu)-Phe-OGly-OH-t kapunk, olvadáspont: 83-85 °C (bomlik) [a]D = —30,6° (c = 1,36, etanolban), R| = 0,45, kromatográfiásan kevés szennyezést tartalmaz. 5. lépés 2-(L-Aszparagil-L-fenil-alaníl-amino-oxi)-ecetsav-hidroklorid 8,50 g (16,7 mmól) BOC—Asp(0*Bu)—Phe—OGly—OH-t (4. lépés) 70 ml (350 mmól) 5 n sósavas etil-acetátba szórunk keverés közben. A kiindulási anyag azonnal feloldódik, és a reakcióelegyből 5 perc után kristályosán kezd válni a végtermék. A szuszpenziót 75 perc múlva leszűrjük, a csapadékot etil-acetáttal mossuk, így 6,22 g (95,8%) kristályos H—Asp-Phe—OGly-OH • HCl-t kapunk, olvadáspont: 160—163 °C. R’ =0,25. 6. lépés 2-[N-(terc-Butil-oxi-karbonil)-L-metionil-L-aszparagil-L-fenil-alanil-amino-oxi] ecetsav 6,1 g (15,6 mmól) H—Asp-Phe-OGly—OH • • HCl-ot (5. lépés) 50 ml DMF-ban oldunk az oldathoz 6,55 ml (46,8 mmól) trietilamint adunk. Az így kapott szuszpenzióhoz 6,38 g (15,6 mmól) BOC—Met-OSu-t adunk és feloldódása után a reakcióelegyet éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. A reakcióelegyet vákuumban bepároljuk, majd a maradék olajszerű anyagot diizopropil-éterrel megszilárdítjuk. A szűréssel izolált 6,3 g (69%) nyersterméket kevés 7. futtatóelegyben oldva 110 g szilikagéloszlopra töltjük. Az elúciót 8-10ml/óra sebességgel a 7. futtatóeleggyel végezzük. A tiszta frakciókat összegyűjtjük, vákuumban bepároljuk, és a kapott olajszerű anyagot diizopropil-éterrel megszilárdítjuk. A kapott 4,4 g súlyú terméket 15 ml metanolban oldjuk, majd tízszeres mennyiségű vízmentes éterrel kicsapjuk. így 3,26 g (35,7%) kromatográfiásan egységes, amorf, BOC-Met—Asp-Phe-OGly-OH-t kapunk, Rf = 0,30, [a]D = -37,2° (c = 1,0, etanolban). Elemzési eredmények a C25H36OioN4S összegképlet (molekulasúly: 584,65) alapján: számított: C =51,36%, H =6,21%, N = 9,58%, S = 5,48%, talált: C =51,50%, H =6,07%, N = 9,43%, S =5,47%. 7. lépés 2-(L-Metionil-L-aszparagil-L-fenil-alanil-amino-oxi)-ecetsav-hidroklorid 0,50 g (0,85 mmól) BOC-Met-Asp-Phe-OGly-OH-t (6. lépés) 5 ml sósavas etil-acetáttal keze5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
