175152. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új amino-oxi-savakat tartalmazó, gasztrin-hatású peptidek előállítására
15 175152 16 mentes éterrel felhígítjuk, a szuszpenziót rövid ideig hidegen állni hagyjuk, majd leszűrjük, és a csapadékot vízmentes éterrel alaposan kimossuk, így 6,20 g (94%) H-Leu-Asp -Phe-NH2 • HCl-ot kapunk, (R| = 0,2) amelyet további tisztítás nélkül használunk fel a következő kapcsoláshoz. 2. lépés N-(terc-Butil-oxi-karbonil)-L-triptofil-L-leucil-L-aszparagil-L-fenil-alan in-amid 6,2 g (14,5 mmól) H-Leu-Asp-Phe-NH2 • •HCl-ot (1. lépés) és 6,42 g (16,0 mmól) BOC—Trp—OSu-t 70 ml DMF-ban feloldva reagáltatunk 2,24 ml (16,0 mmól) trietilamin jelenlétében. 4 óra múlva a reakcióelegyet vákuumban bepároljuk, és a maradékot vízzel eldórzsölve szűrjük. A 10,6 g súlyú nyersterméket metanol- és etil-acetát elegyével kétszer felforraljuk, majd a gélszerű terméket hidegen állni hagyjuk, majd leszűrjük. így 7,1 g (72,1%) BOC—Trp—Leu—Asp—Phe—NH2-ot kapunk, olvadáspont: 218—221 °C (bomlik), R|=0,4, ezt tisztítás nélkül használjuk fel a következő lépéshez. 3. lépés L-Triptofil-L-leucil-L-aszparagil-L-fenil-alanin-amid 7,1 g (10,5 mmól) BOC-Trp-Leu-Asp-Phe-NH2-ot (2. lépés) 60 ml 4n sósavas dioxánba szórunk. A reakcióelegy 3 perc múlva kitisztul. 10 perc múlva az oldatot vízmentes éterrel felhígítjuk, a leváló olajos terméket megszilárdítjuk és szűrjük. A kapott 6,96 g hidrokloridot 150 ml vízben melegen oldjuk. Az oldat pH-ját hűtés közben szilárd nátrium-hidrogén-karbonáttal 7-re állítjuk. A szuszpenziót szűrjük, és a csapadékot vízzel bőven mossuk. így 5,05 g (83,1%) kromatográfiásan egységes H-Trp-Leu—Asp-Phe—NH2-ot kapunk (4. példa, 4. lépés), olvadáspont: 228—230 °C (bomlik). 4. lépés 2-(terc-Butil-oxi-karbonil-amino-oxi)-D-propionsav-(pentaklór-fenil)-észter 4,10 g (20 mmól) BOC—D-OAla-OH-t és 5,32 g (20 mmól) pentaklórfenolt feloldunk 20 ml dimetil-formamidban, az oldatot 0 °C-ra hűtjük, és 4,12 g (20 mmól) DCC-t adunk hozzá. A reakcióelegyet fél órán át 0 °C-on keverjük, majd éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. A kivált DCU kiszűrése után a szürletet vákuumban bepároljuk, és a kristályos maradékot vízmentes éterrel való eldörzsölés után szűrjük. A 6,25 g súlyú nyersterméket etanolból kristályosítjuk. így 5,80 g (64%) BOC-D-OAla-OPCP-t kapunk, olvadáspont: 123-124 °C, Rl = 0,85. [a]D = +68,95° (c = 1,0, dioxánban). Elemzési eredmények a C14H14O5NCI5 összegképlet (molekulasúly: 453,537) alapján: 3 számított: C =37,10%, H =3,10%, Cl =39,10%, talált: C =37,16%, H =3,29%, Cl = 39,01%. 5. lépés 2-(terc-Butil-oxi-karbonil-amino-oxi)-D-propionil-L-triptofil-L-leucil-L-aszparagil-L-fenil-alanin-amid 1,74 g (3,0 mmól) H—Trp—Leu—Asp-Phe—NH2-ot (4. példa, 4. lépés és 5. példa, 3. lépés) és 1,50 g (3,3 mmól) BOC-D-OAla-OPCP-t (4. lépés) 20 ml DMF-ban feloldva reagáltatunk 0,42 ml (3,0 mmól) trietilamin jelenlétében. Másnap a reakcióelegyet vákuumban bepároljuk, és a maradékot éterrel eldörzsöljük. Az elméleti mennyiségnél több, 2,61 g súlyú nyersterméket kevés 5. futtatóelegyben oldva 100 g szilikagélből készített oszlopra visszük, és 5. futtatóeleggyel eluáljuk. A tiszta frakciókat összegyűjtjük, és a kristályos maradékot 50 ml 80%-os etanolból kristályosítjuk. így 1,07 g (46,7%) BOC-D—OAla—Trp-Leu-Asp-Phe-NH2-ot kapunk. Bomláspont: 210 °C, [a]D = -6,0° (c = 1, dimetilformamidban), Rf = 0,15, Rfs =0,40. Elemzési eredmények a C38H51OioN7 összegképlet (molekulasúly: 765,88) alapján: számított: C =59,59%, H =6,71%, N = 12,80%, talált: C =59,37%, H =6,90%, N =13,10%. 6. példa 1. lépés 2-[N-(terc-Butil-oxi-karbonil)-L-fenil-alanil-amino-oxi]-ecetsav 6,97 g (40,5 mmól) amino-oxi-ecetsav-hidrobromidot és 14,68 g (40,5 mmól) BOC-Phe-OSu-t 6,3 ml (45 mmól) trietilamin jelenlétében reagáltatunk 100 ml DMF-ban. Másnap a reakcióelegyet vákuumban bepároljuk, a maradék olajat 100 ml kloroformban feloldjuk, és 1 n sósav-oldattal háromszor kirázzuk. A kloroformos oldatot szárítás után vákuumban bepároljuk, az olajos maradékot diizopropil-éterrel megszilárdítjuk. A nyersterméket etil-acetát-diizopropil-éter rendszerben átcsapással tisztítjuk. így 9,70 g (74%) BOC-Phe-OGly-OH-t kapunk, olvadáspont: 136-137 °C, R|=0,4. [“Id = -17,8° (c = 1,0, etanolban). Elemzési eredmények a C16H2206N2 összegképlet (molekulasúly: 338,36) alapján: számított: C = 56,80%, H = 6,55%, N = 8,28%, talált: C =56,59%, H =6,41%, N = 8,42%. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
