175152. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új amino-oxi-savakat tartalmazó, gasztrin-hatású peptidek előállítására
13 175152 14 45 ml etanolból kristályosítjuk. így 7,26 g (83,5%) Z—Leu—Asp(OlBu)—Phe—NH2-ot kapunk, olvadáspont: 180-181 °C, R? = 0,6, [a]D = -36,8° (c = 1.0, etanolban). Elemzési eredmények a C31H4 2 07N4 összegképlet (molekulasúly: 582,68) alapján: számított: C =63,90%, H =7,27%, N = 9,62%, talált: C =63,70%, H =7,41%, N = 9,73%. 2. lépés L-Leucil-L-aszparagil-j3-(terc-butil--észter)-L-fenil-alanin-amid 6,76 g (11,6 mmól) Z—Leu—Asp(0*Bu)—Phe—NH2-ot (1. lépés) 300 ml metanolban oldva 1,0 g csontszenes 10%-os palládium-katalizátor jelenlétében keverés közben hidrogéngáz átbuborékolta.tásával redukálunk. Másfél óra múlva a reakcióelegyből kiszűrjük a katalizátort, és a szűrletet bepároljuk. A gélszerű maradékot n-hexánnal izoláljuk, így 5,2 g (99,5%) H-Leu-Asp-ÍO'BuJ-Phe—NH2-ot kapunk, amelyet további tisztítás nélkül használunk fel, Rf =0,1. 3. lépés N-(terc-Butil-oxi-karbonil)-L-triptofil-L--leucil-L-aszparagü-|3-(terc-butil--észter)-L-fenil-alanin-amid 5,2 g (11,5 mmól) H—Leu-Asp(0*Bu)—Phe—NH2-ot (2. lépés) és 4,82 g (12,0 mmól) BOC—Trp—OSu-t 100 ml DMF-ban feloldva állni hagyunk. A reakcióelegyet másnap vákuumban bepároljuk, a szilárd maradékot vízzel eldörzsölve leszűrjük. Az elméleti mennyiségnél több, 8,95 g súlyú nyersterméket 70 ml 70%-os etanolból derítéssel átkristályosítjuk. így 7,19 g (84,5%) BOC—Trp—Leu—Asp(0*Bu)—Phe—NH2-ot kapunk, olvadáspont: 176—177 °C, Rf =0,65. Az elemi analízishez kis mennyiséget tízszeres 80%-os etanolból átkristályosítunk, olvadáspont: 180—182 °C. [a]D = -35,3° (c = 1,0, dimetil-formamidban). Elemzési eredmények a C39H54N608 összegképlet (molekulasúly: 725,68) alapján: számított: C =63,74%, N =7,41%, N =11,44%, talált: C =63,62%, N =7,62%, N =11,17%. 4. lépés L-Triptofil-L-leucil-L-aszparagil-L-fenil-alanin-amid 6,59 g (9,0 mmól) BOC-Trp-Leu-AspíC^Bu)—Phe—NH2-ot (3. lépés) beleszórunk 60 ml trifluor-ecetsav és 6 ml anizol elegyébe. A reakcióelegyet két órán keresztül szobahőmérsékleten keverjük, majd vízmentes éterrel felhígítjuk. A szűrés után kapott kenőcsszerű anyagot exszikkátorban szárít juk nátriumhidroxid és foszforpentoxid jelenlétében. A nyersterméket vízzel eldörzsöljük, így 5,61 g trifluoracetátot kapunk, olvadáspont: 178—186 °C (bomlik). A sót kevés etanolt tartalmazó vízben melegen feloldjuk, majd az oldat pH-ját 7-re állítjuk 1 n nátrium-hidroxid-oldattal hűtés közben. A kivált csapadékot szűrjük, vízzel és etanollal mossuk. A 4,0 g nyersterméket először etanoUal mossuk, majd 30 ml DMF-ban feloldjuk és 60 ml etanollal kicsapjuk. így 2,28 g kromatográfiásan egységes H-Trp-Leu-Asp—Phe-NH2-ot kapunk, olvadáspont: 227-230 °C (bomlik), Rf = 0,55. Elemzési eredmények a C30H38N6O6 összegképlet (molekulasúly: 578,67) alapján: számított: C =62,26%, H =6,62%, N = 14,52%, talált: C =62,02%, H =6,80%. N = 14,38%. 5. lépés 2-(terc-Butil-oxi-karbonil-amino-oxi)-acetil-L-triptofil-L-leucil-L-aszparagil-L-fenil-alanin-amid 1,0 g (1,82 mmól) H-Trp-Leu-Asp—Phe—NH2-ot (4. lépés) és 0,88 g (2,0 mmól) BOC—OGly—OPCP-t 10 ml DMF-ban oldunk, és az oldathoz hozzáadunk 0,27 ml (1,82 mmól) trietilamint. A reakcióelegyet másnap vákuumban bepároljuk, a maradékot éterrel eldörzsöljük, és a szuszpenziót hidegen állni hagyjuk, majd leszűrjük. 1,42 g nyersterméket kapunk, olvadáspont: 102-120 °C (bomlik), amelyet tízszeres mennyiségű etil-acetáttal felforralunk, és a szuszpenziót melegen szűrjük. A kapott 1,06 g anyagot az 5. futtatóelegyben oldva 80 g szilikagélből készült oszlopra visszük, és a 10. futtatóeleggyel eluáljuk. A tiszta frakciókat összegyűjtjük. így 0,58 g BOC—OGly-Trp—Leu—Asp-Phe-NH2-ot kapunk, olvadáspont: 187° (bomlik) [a]D = —24,9° (c = 0,5, dimetil-formamidban), Rf =0,7, Rf =0,15. Elemzési eredmények a C37H49Oi0N7 összegképlet (molekulasúly: 751,85) alapján: számított: C =59,11%, H =6,57%, N = 13,04%, talált: C = 59,28%, II =6,40%, N = 12,75%. 5. példa 1. lépés L-Leucil-L-aszparagil-L-fenil-alanin-amid-hidroklorid 6,91 g (15,4 mmól) H—Leu-Asp(OtBu)-Phe—NH2-ot (4. példa, 2. lépés) 50 ml 4n sósavas ecetsavba szórunk. 45 perc múlva az oldatot viz-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 7
