175152. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új amino-oxi-savakat tartalmazó, gasztrin-hatású peptidek előállítására
11 175152 12 10. lépés (terc-Butil-oxi-karbonil-amino-oxi)-acetü-L--triptofil-L-metionil-L-aszparagil-L-fenil-alanin-amid 1,79 g (3,0 minői) H—Trp—Met—Asp—Phe-NH2 • H20-t (8. lépés) és 1,18 g (3,3 mmól) BOC-OGly-OPCP-t (9. lépés) 30 ml dimetilformamidban oldva reagáltatunk. 4 óra múlva a reakcióelegyet vákuumban bepároljuk és a gélszerű maradékot etil-acetáttal eldörzsöljük. A 2,11 g (91%) olvadáspont: 178-184 °C, bomlik) nyersterméket 20 ml metanolban oldva derítjük, majd vízzel kicsapjuk. így 1,50 g (64,8%) kristályos, fehér BOC-OGly—Trp-Met-Asp-Phe—NH2-ot kapunk, olvadáspont: 193-194 °C, Rf = 0,40, [a]D=-16,2° (c = 1,0, dimetil-formamidban). Elemzési eredmények a C36H47Oi0N7S összegképlet (molekulasúly: 769,85) alapján: számított: C =56,1%, H =6,1%, S = 4,16%, talált: C = 56,4%, H = 6,3%, S =4,07%. 2. példa (Amino-oxi)-acetil-L-triptofil-L-metionil-L-aszparagil-L-fenil-alanin-amid 1,0 g (1,3 mmól) BOC—OGly—Trp—Met—Asp-Phe-NH2-ot (1. példa, 10. lépés) 4 ml trifluor-ecetsav, 1 ml víz, 0,5 ml anizol elegyébe szórunk keverés közben, és a reakcióelegyen nitrogéngázt buborékoltatunk át 2 órán keresztül. A reakcióelegyet 40 ml éterrel hígítjuk, és a kapott 1,02 g trifluor-acetátot 34 ml víz és 2,9 ml In nátrium-hidroxid-oldat elegyében feloldjuk, majd a szabad amidot 1,32 ml ecetsav hozzáadásával kicsapjuk. Szűréskor a csapadékot vízzel alaposan mossuk, és exszikkátorban szárítjuk. így 0,6 g (69%) H-OGly—Trp-Met—Asp—Phe—NH2-ot kapunk, olvadáspont: 183-184 °C, R* = 0,5, [a]D=-31,6° (c = l,0, dimetil-formamidban). Elemzési eredmények a C31H390gN7S összegképlet (molekulasúly: 669,763) alapján: számított: C = 55,59%, H = 5,87%, N = 14,60%, S =4,79%, talált: C =55,41%, H=5,93%, N = 14,41%, S =4,71%. 3'. példa 1. lépés 241 erc-Butil-oxi~karbonil-amino-oxi)-L-propionsav-(pentaklór-fenil)-észter 4,10 g (20 mmól) BOC—D—OAla—OH-t és 5,32 g (20 mmól) pentaklórfenolt feloldunk 20 ml dimetil-formamidban, az oldatot 0 °C-ra hűtjük, és 4,12 g (20 mmól) DCC-t adunk hozzá. A reakcióelegyet fél órán át 0 °C-on keverjük, majd szobahőmérsékleten éjszakán át állni hagyjuk. A kivált DCU kiszűrése után a szűrletet vákuumban bepároljuk, és a kristályos maradékot vízmentes éterrel való eldörzsölés után szűrjük. A 6,25 g súlyú nyersterméket etanolból kristályosítjuk. így 5,80 g (63%) BOC—D—OAla—OPCP-t kapunk, olvadáspont: 122-124 °C, Rj = 0,85, [a]D = -68,87% (c=l,0, dioxánban). Elemzési eredmények a C14Hi405NC1s összegképlet (molekulasúly 453,537) alapján: számított: C = 37,07%, H = 3,11%, Cl = 39,08%, talált: C =37,22%, H =3,07%, Cl = 39,27%. 2. lépés 2-(terc-Butil-oxi-karbonil-amino-oxi)-L-propionil-L-triptofil-L-metionil-L-aszparagil-L-fenil-alanin-amid 0,70 g (1,22 mmól) H-Trp-Met—Asp-Phe—NH2 • H2Ö-t (1. példa, 8. lépés) és 0,59 g (1,30 mmól) BOC—L—OAla—OPCP-t (1. lépés) 50 ml dimetilformamidban reagáltatunk 0,35 ml (2,5 mmól) trietilamin jelenlétében. Másnap a reakcióelegyet vákuumban bepároljuk, a gélszerű maradékot etil-acetáttal szűrjük. A kapott 0,69 g nyersterméket 15 ml etil-acetáttal felforraljuk, majd a terméket kiszűrjük a forró szuszpenzióból. A tisztított termék súlya 0,50 g, ezt kevés 6. futtatóelegyben oldva 40 g szilikagélből készített ^oszlopra viszszük fel, és az 5. futtatóeleggyel eluáljuk. Ily módon a tiszta frakciókból 0,30 g kromatográfiásan egységes BOC—L—OAla—Trp—Met— Asp—Phe—NH2-ot különíthetünk el, olvadáspont: 199 °C (bomlik), RJ =0,15, R| =0,30. Elemzési eredmények a C37H49OioN7S összegképlet (molekulasúly: 783,88) alapján: számított: C =56,69%, H =6,30%, N = 12,51%, talált: C =56,50%, H =6,29%, N = 12,34%. 4. példa 1. lépés N-(Benzil-oxi-karbonil)-L-leucil-L-aszparagil--0-(terc-butil-észter)-L-fenil-alanin-amid 5,0 g (14,9 mmól) H-Asp(0‘Bu)-Phe-NH2-ot (1. példa, 4. lépés) és 5,5 g (15,2 mmól) Z—Leu-OSu-t 50 ml kloroformban reagáltatunk. A reakcióelegy kezdetben tiszta oldat, később gélesedik, majd megszilárdul. Kloroformmal való hígítás után a reakcióelegyet éjszakán át keverjük, majd vákuumban bepároljuk, és a maradékot vízzel eldörzsölve szűrjük. A 8,6 g (op.: 170 °C) nyersterméket 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6
