175152. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új amino-oxi-savakat tartalmazó, gasztrin-hatású peptidek előállítására
9 175152 10 penziót éjszakán át hidegen állni hagyjuk, majd szüljük. így 10,40 g (95,8%) H-Asp(0*Bu)-Phe—NH2-ot kapunk, olvadáspont: 121,0-121,5 °C Rf + 0,35. 5. lépés N-(terc-Butil-oxi-karbonil)-L-metionil-L-aszparagil-ß-( terc-b util-észter)-L-fenil-alanin-amid 10,4 g (31 mmól) H—Asp(0*Bu)—Phe—NH2-ot (4. lépés) és 11,1 g (32 mmól) BOC—Met—OSu-t 100 ml kloroformban feloldunk, majd éjszakán át állni hagyjuk. Másnap a reakcióelegyet vízzel 3-szor kirázzuk, majd a kloroformos oldatot szárítás után vákuumban bepároljuk. A gélszerű maradékot éterrel eldörzsöljük, hidegen állni hagyjuk, majd szűrjük. így 14,5 g (82,7%) nyersterméket kapunk, olvadáspont: 148—149 °C, amelyet 40 ml metanolban oldva csontszénnel derítjük, majd a szűrletet, amelyből kezd kiválni a termék, 40 ml éterrel felhígítjuk. így 12,80 g (73%) BOC-Met-Asp(0'Bu) —Phe —NH2-ot kapunk, olvadáspont: 151-152 °C, Rf = 0,65. 6. lépés L-Metionil-L-aszparagil-L-fenil-alanin-amid-hidroklorid 12,50 g (22,1 mmól) BOC-Met-AspiO'ßu)-Phe-NH2-ot (5. lépés) melegen feloldunk 25 ml ecetsavban, majd az oldathoz hűtés után 30 ml 7,4 n etil-acetátos-sósav-oldatot adunk. A reakcióelegy 5 perc múlva megzavarosodik, olaj válik ki. 10 perc után a reakcióelegyet éterrel felhígítjuk, és a kapott szuszpenziót szűrjük. Az elméletileg számítottnál nagyobb mennyiségű (10,24 g) nyersterméket 40 ml metanolban feloldjuk, és 200 ml etil-acetáttal kicsapjuk. A nehezen szűrhető, kellemetlenül gélszerű terméket éjszakán át hidegen állni hagyjuk, majd leszűrjük. így 9,0 g (91%) H-Met-Asp-Phe-NH2 • HCl-ot kapunk, olvadáspont: 187-189 °C, Rf =0,27. 7. lépés N-(terc-Butil-oxi-karbonil)-L-triptofil-L-metionil-L-aszparagil-L-fenil-alan in-amid 9,0 g (20,1 mmól) H-Met-Asp-Phe—NH2 • HCl-ot (6. lépés) és 8,42 g (21 mmól) BOC—Trp—OSu-t 150 ml dimetilformamidban szuszpendálunk, majd a szuszpenzióhoz hozzáadunk 2,83 ml (20,1 mmól) trietilamint. A reakcióelegyet éjszakán át keverjük, majd 1,0 liter jeges víz és 3,75 ml ecetsav elegyébe öntjük. A szuszpenziót a jég felolvadásáig állni hagyjuk, majd szűrjük. A gélszerű csapadékot vízzel, majd éterrel bőven mossuk. A 13,3 g (95%) súlyú nyersterméket (olvadáspont: 203—204 °C) körülbelül 30*szoros 80%-os vizes etanolból derítéssel kétszer átkristályosítjuk, így 9,67 g (69%) BOC-Trp-Met-Asp-Phe-NH2- -ot kapunk, olvadáspont: 212-214 °C (bomlik), Rj = 0,43. 8. lépés L-Triptofil-L-metionil-L-aszparagil-L-fenil-alanin-amid-monohidrát 9,23 g (13,2 mmól) BOC—Trp—Met-Asp-Phe—NH2-ot (7. lépés) 32 ml trifluor-ecetsav, 8 ml víz és 4 ml anizol elegyébe szórunk 0 °C-on keverés közben. A reakcióelegyen 2 órán keresztül nitrogéngázt buborékoltatunk át, majd az oldato' 270 ml éterrel hűtés közben felhígítjuk. A szuszpenziót leszűrjük, és a csapadékot bőven mossuk éterrel, majd exszikkátorban szárítjuk. A nyersterméket 60 ml metanolban feloldjuk, és 240 ml éterrel kicsapjuk a trifluor-acetátot. Az így tisztított sót feloldjuk 340 ml víz és 29 ml In nátrium-hidroxid-oldatban, majd a szabad tetrapeptidamidot 13,2 ml ecetsav hozzáadásával kicsapjuk. A szuszpenziót rövid ideig hidegen állni hagyjuk, majd szűrjük, és a csapadékot bőven átmossuk vízzel, így 6,70 g (82,4%) H-Trp-Met-Asp-Phe-NH2 • H20-t kapunk, olvadáspont: 235-238 °C, Rf =0,35. Elemzési eredmények a C29H3606N6S • H20 összegképlet alapján (molekulasúly: 614,725): számított: C =56,6%, H =6,2%, N = 13,7%, talált: C =56,4%, H =6,2%, N = 13,6%. 9. lépés terc-Butil-oxi-karbonil-amino-oxi-ecetsav-(pentaklór-fenil)-észter 8,0 g (41,8 mmól) BOC-OGly-OH-at és 11,1 g (42,0 mmól) pentaklór-fenolt feloldunk 160 ml vízmentes dioxánban, az oldatot 5 °C alá hűtjük, és hozzáadunk 8,6 g (42,0 mmól) diciklohexil-karbodiimidet (DCC). A reakcióelegyet éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd a kivált diciklohexil-karbamidot (DCU) kiszűrjük. A szűrletet vákuumban bepároljuk, és a szilárd maradékot dioxán-etanol elegyből átkristályosítjuk. így 13,7 g (74,3%) BOC-OGly-OPCP-t kapunk, olvadáspont: 167-168 °C, Rf =0,7. Elemzési eredmények a C13H12OsNCls összegképlet (molekulasúly: 439,510) alapján: számított: C =35,52%, H = 2,75%, N = 3,18%, Cl =40,33%, talált: C =35,37%, H = 2,90%, N = 3,31%, a =40,12%. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
