175152. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új amino-oxi-savakat tartalmazó, gasztrin-hatású peptidek előállítására
7 175152 8-oxi)-ecetsav rövidítésére az OGly, az a-(amino-oxi)-propionsavéra az OAla szimbólumot használjuk. További rövidítések: DCC = diciklohexil-karbodiimid, PCPOH = pentaklór-fenol, PFPOH = pentafluor-fenol, SuOH = N-hidroxi-szukcinimid, DMF = dimetil-formamid, HMFA = hexametil-foszforsavtriamid. A vegyületek olvadáspontját Dr. Tottoli-féle (Büchi) olvadáspontmérő készüléken határoztuk meg. A vékonyréteg-kromatogramokat Stahl-szerint készített, Kieselgel G márkanevű szilikagél rétegen készítettük. A kromatogramok kifejlesztésére a következő oldószerelegyeket használtuk: 1. kloroform : metanol 95 : 5 2. kloroform : metanol 9 : 1 3. kloroform : n-hexán : ecetsav 8:1:1 4. etil-acetát : (piridin, : ecetsav : víz = 20 : 6 : 11) 9 : 1 5. etil-acetát : (piridin : ecetsav : víz = 20 : 6 : 11) 8:2 6. etil-acetát : (piridin : ecetsav : víz = 20 : 6 : 11 ) 7:3 7. etil-acetát : (piridin : ecetsav : víz = 20 : 6 : 11) 3 : 2 8. etil-acetát : (piridin : ecetsav : víz = 20 : 6 : 11) 1 :1 9. etil-acetát : (piridin ' ecetsav : víz = 20 : 6 : 11 ) 2:3 10. etil-acetát : (piridin : ecetsav : víz = 20 : 6 : 11) 85 : 15 A vékonyrétegkromatogramok előhívására ninhidrin-oldatot használtunk, a permetezést követően körülbelül 5 percig 105 °C-on szárítottuk a lemezeket. Ezt követően a kromatogramokat klórgázba helyeztük, majd szellőztetés után o-tolidin-KJ oldattal hívtuk elő. Az anyagok oszlopkromatográfiás tisztításához 62-200 jam szemcseméret-tartományű Kieselgel G szilikagélt használtunk. 1. példa 1. lépés N-(Benzil-oxi-karbonil)-L-fenil-alanin-amid 12,0 g (40 mmól) Z-Phe-OH-t feloldunk 80 ml vízmentes tetrahidrofuránban. Az oldathoz hozzáadunk 5,60 ml (40 mmól) trietil-amint, majd-10°C-on hozzácsöpögtetünk 3,80 ml (40 mmól) klór-szénsav-etil-észtert. Ezután 10 percen át —10°C-on keverjük a szuszpenziót, majd egy órán keresztül ammóníagázt vezetünk a reakcióelegybe vízzel való hűtés közben. A reakcióelegyet másnap vákuumban bepároljuk, és a kristályos maradékot 40 ml 40-50 °C-os vízzel eldörzsöljük. A 8,84 g nyersterméket derítéssel hétszeres mennyiségű etanolból átkristályosítjuk. így 6,55 g (55%) Z—Phe-NH2-ot kapunk, amelynek olvadáspontja 165-166 °C, Rf =0,75. 2. lépés L-Fenil-alanin-amid-hidrobromid 6,55 g (22 mmól) Z—Phe—NH2-ot (1. lépés) 13 mi ecetsavban feloldunk, majd az oldathoz 30 ml 5 n ecetsavas-hidrogén-bromid-oldatot adunk. 5 percen át tartó keverés után a reakcióelegy beáll, 1 óra állás után a szuszpenziót vízmentes éterrel felhígítjuk és leszűrjük. A nyersterméket 240 ml etanolban oldva derítjük, majd 740 ml éterrel kicsapjuk. így 4,90 g (91%) fehér, kristályos, kromatográfiásan egységes H—Phe—NH2 • HBr-ot kapunk (a vékonyréteg-kromatogramon két folt látható: a terméké ás a hidrogén-bromidé, olvadáspont: 249 — 250 °C, R| = 0,50, a hidrogén-bromidé R® = 0,35. 3. lépés N-(Benzil-oxi-karbonil)-L-aszparagil-j3- -(terc-butil-észter)-L-fenil-al an in-amid 9,45 g (38,5 mmól) H—Phe-NH2 • HBr-ot (2. lépés) 100 ml vízmentes tetrahidrofuránban szuszpendálva 5,40 ml (38,5 mmól) trietilaminnal felszabadítunk, majd a szuszpenzióhoz hozzáadunk 16,2 g (38,5 mmól) Z—Asp(OtBu)—OSu-t. A reakcióelegyet másnap vákuumban bepároljuk, a maradékot feloldjuk 500 ml etil-acetátban, majd 3-szor 10%-os citromsav-oldattal és 3-szor 5%-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal kirázzuk. Az oldatot melegen csontszénnel derítjük és vízmentes nátrium-szulfáttal szárítjuk, majd szűrés után vákuumban betöményítjük. Körülbelül 200 ml-es térfogatban újra feloldjuk a bepárláskor kivált anyagot, majd kristályosodni hagyjuk. így 15,17 g (84%) kromatográfiásan egységes Z—AspfO* Bu)—Phe—NH2-ot kapunk, olvadáspont: 160—161 °C, R? = 0,70. 4. lépés L-Aszparagil-/3-(terc-butil-észter)-L-fenilalanin-amid 15,17 g (32,3 mmól) Z-Asp(OtBu)—Phe—NH2- -ot (3. lépés) 1,0 liter metanolban oldva 2,0 g csontszenes 10%-os palládium-katalizátor jelenlétében keverés közben hidrogén gáz átbuborékoltatásával redukálunk. 2 óra után a szuszpenziót szűrjük, a szűrletet vákuumban bepároljuk, a szilárd maradékot diizopropil-éterrel eldörzsöljük, a szusz5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
