175152. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új amino-oxi-savakat tartalmazó, gasztrin-hatású peptidek előállítására
27 175152 28 oldva 0 °C-on 2,99 g (14,5 mmól) DCC-vel reagáltatunk. A reakcióelegyet 1 órán keresztül szobahőmérsékleten, majd 1 órán keresztül 0 °C-on keverjük. A kivált DCU kiszűrése után a szűrletet vákuumban bepároljuk, a maradék olajszerű anyagot 40 ml n-hexánban oldjuk. Az oldatot 20-20 ml 5%-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal ötször, majd 20-20 ml vízzel kétszer kirázzuk, és szárítás után vákuumban bepároljuk. A maradék olajszerű anyag, hidegen kristályosodik. így 5,82 g (87,5%) BOC-L-Ade-OPFP-t kapunk, olvadáspont 45-46 °C, Rj = 0,85, [a]D=-18,l° (c = 1,0, dioxánban). Elemzési eredmények a C21H2804NFS összegképlet (molekulasúly: 434,45) alapján: számított: C = 55,63%, H = 6,22%, F =20,95%, talált: C = 55,56%, H=5,96%, F =20,89%. 2. lépés 2-L-(terc-Butil-oxi-karbonil-amino)-dekanoil-L-aszparagü-/3-(terc-butil-észter)-L-fenil-alanin-amid 1,0 g (0,3 mmól) H-Asp-(0*Bu)-Phe-NH2-ot (1. példa, 4. lépés) és 1,36 g (3,0 mmól) BOC—Ade-OPFP-t 10 ml DMF-ban oldva reagáltatunk egymással, 0,42 ml (3,0 mmól) trietil-amin jelenlétében. 1,5 óra múlva a reakcióelegyet vákuumban bepároljuk, a maradékot éterrel megszilárdítjuk, majd a szuszpenziót hidegen szűrjük. így 1,65 g (90,8%) BOC—L—Ade—Asp(0*Bu)—Phe—NH2 -ot kapunk, olvadáspont: 142—143 °C, Rjí=0,70, [a]D = —32,4° (c = 1,0, dimetil-formamidban). Elemzési eredmények a C32H5207N4 összegképlet (molekulasúly: 604 ; 77) alapján: számított: C =63,55%, H =8,67%, N = 9,27%, talált: C =63,34%, H =8,70%, N = 9,26%. 3. lépés 2-L-Amino-dekanoil-L-aszparagil-L-fenil--alanin-amid-hidroklorid 1,45 g (2,39 mmól) BOC—L-Ade—Asp(OlBu)—Phe—NH2 -ot 15 ml 4 n sósavas ecetsavval kezelünk. 1 óra elteltével az oldatot vákuumban bepároljuk, a szilárd maradékot éterrel szűrjük. így 1,03 g (88,9%) H-L-Ade-Asp—Phe-NH2 • HCl-ot kapunk, olvadáspont: 180-181 °C, R/=0,35, [a]D = —12,1° (c = 1,0, dimetil-formamidban). 4. lépés NQ-terc-Butil-oxi-karbonil-Njn<i-formil-L-triptofil-2-L-amino-dekanoil-L-aszparagil-L -fenil-alanin-amid 0,90 g (1,86 mmól) H—L—Ade—Asp—Phe--NH2 • HCl-ot és 0,93 g (1,86 mmól) BOC-Trp(For)OPFP-t 0,52 ml (3,72 mmól) trietil-amin jelenlétében 15 ml DMF-ban oldva reagáltatunk. Másnap a reakcióelegyet vákuumban bepároljuk, a maradékot vízzel megszilárdítjuk. A szuszpenziót szűrjük, a csapadékot vízzel és éterrel mossuk. így 1,20 g (87,5%) BOC—Trp(For)—L—Ade—Asp—Phe-NH2-ot kapunk, olvadáspont: 204°C (bomlik), [&]d =—29,1° (c=l,0, dimetil-formamidban), Rf = 0,45. Elemzési eredmények a C4oHS408N6 összegképlet (molekulasúly: 762,88) alapján: számított: C =62,97%, H =7,14%, N =11,02%, talált: C =62,71%, H =7,14%, N = 11,06%. 5. lépés (terc-Butil-oxi-karbonil-amino-oxi)-acetil--L-Triptofll-2-L-amino-dekanoil-L-aszparagil--L-fenil-alanin-amid-hidroklorid 1,05 g (1,37 mmól) BOC—Trp(For)—L—Ade-Asp-Phe-NH2 -ot 10 ml 4 n sósavas dioxánnal kezelünk 0,49 ml (7,0 mmól) merkapto-etanol jelenlétében. 15 perc után a reakcióelegyet vákuumban bepároljuk, a maradékot éterrel szűrjük. A kapott 0,91 g (99%) H—Trp—L—Ade—Asp—Phe-NH2 • HCl-ot és 0,54 g (1,22 mmól) BOC-OGly-OPFP-t (1. példa, 9. lépés) 0,51 ml (3,66 mmól) trietil-amin jelenlétében reagáltatunk 10 ml DMF-ban. Másnap a reakcióelegyet vákuumban bepároljuk, a maradékot vízzel megszilárdítjuk, majd a szuszpenziót szűrjük, és a csapadékot vízzel és éterrel mossuk. A 0,95 g nyersterméket 10. futtatóeleggyel szilikagélen oszlopkromatografáljuk a szokásos módon. A tiszta frakciók bepárlásával 0,43 g BOC-OGly-Trp-L-Ade—Asp—Phe—NH2-ot kapunk, olvadáspont: 216—217 °C (bomlik) R|=0,35, Rf0 = 0,25, [a]D=-18,7° (c = l,0, dimetil-formamidban). Elemzési eredmények a C4iHS7OioN7 összegképlet (molekulasúly: 808,01) alapján: számított: C =60,95%, H =7,11%, N =12,13%, talált: C =60,92%, H =7,07%, N = 12,09%. 13. példa 1. lépés 2-D-(terc-Butil-oxi-karbonil-amino)-dekánsav-pentafluor-fenil-észter Teljesen azonos módon készítjük el, mint az L-izomert a 12. példa, 1. lépése szerint. Kitermelés: 75,0%, olvadáspont: 45-46,5 °C, = 0,85, [a]D = +18.1° (c = 1,0, dioxánban). 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 14
