175152. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új amino-oxi-savakat tartalmazó, gasztrin-hatású peptidek előállítására

29

175152

30

2-D-(terc-Butil-oxi-karbonil-amino)-dekanoil-L-aszparagil-0-(terc-butil-észterV-fenil-alanin-amid

1,20 g (3,37 mmól) H—Asp-(Ol Bu)-Phe-NH2-ot (1. példa, 4. lépés) és 1,49 g (3,5 mmól) BOC—D—Ade—OPFP-t 0,49 ml (3,5 mmól) trietil-amin jelenlétében 10 ml DMF-ban reagáltatunk. Másnap a reakcióelegyet vákuumban bepároljuk, a maradékot diizopropü-éterrel szűrjük. így 1,26 g (61,8%) B OC—D—Ade—Asp(0* Bu)—Phe—NH2 -ot

kapunk, olvadáspont: 168—170 °C, Rf = 0,80, Mn = —36,9°, (c = 1,0, dimetil-formamidban).

Elemzési eredmények a C32H5207N4 összegképlet (molekulasúly: 604,77) alapján:

számított: C =63,55%, H =8,67%,

N = 9,27%,

talált: C =63,70%, H=8,80%,

N = 9,52%.

2. lépés

3. lépés

2-D-Amino-dekanoil-L-aszparagil-L-fenil--alanin-amid-hidroklorid

1,10 g (1,82 mmól) BOC—D—Ade—AspíO'Bu)—Phe—NH2 -ot 12 ml 4 n sósavas ecetsawal kezelünk. 1 óra múlva a reakcióelegyet vákuumban bepároljuk, a szilárd maradékot éterrel szűrjük. így 0,87 g (99%) H-D-Ade—Asp-Phe-NH2 • HCl-ot kapunk, olvadáspont: 198—200 °C, Rf =0,50,

[a]D = —76,1° (c = 1,0, dimetil-formamidban).

4. lépés

N-terc-Butil-oxi-karbonil-L-triptofil-2-D-amino-dekanoil-I -aszparagil-L-fenil-alan in-amid

0,80 g (1,65 mmól) H—D—Ade—Asp—Phe--NH2 • HCl-ot és 0,80 g (1,70 mmól) BOC-Trp-OPFP-t 0,70 ml (5,0 mmól) trietil-amin jelenlétében 10 ml DMF-ban reagáltatunk. Másnap a reakcióelegyet vákuumban bepároljuk, a maradékot hidegen megszilárdítjuk éterrel. A szuszpenziót szűrjük és a csapadékot éterrel, kevés ecetsavat tartalmazó vízzel, majd vízzel mossuk. így 1,01 g (83,8%) BOC—Trp-D—Ade—Asp—Phe-NH2-ot kapunk, olvadáspont: 196 °C (bomlik), Rf = 0,50, [a]D = -55,6°, (c = 1,0, dimetil-formamidban).

Elemzési eredmények a C39Hs4 08N6 összegképlet (molekulasúly: 734,87) alapján:

számított: C =63,74%, H =7,41%,

N =11,44%,

talált: C = 63,68%, H = 7,30%,

N =11,40%.

5. lépés

L-Triptofrl-2-D-amino-dekanoil-L-aszparagil--L-fenil-alanin-amid-hidroklorid

0,90 g (1,22 mmól) BOC—Trp—D-Ade-Asp—Phe—NH2-ot 0,43 ml (6,1 mmól) merkapto-etanol jelenlétében 10 ml 4n sósavas dioxánnal kezelünk. 10 perc múlva a reakcióelegyet vákuumban bepároljuk, a maradékot éterrel szűrjük. így 0,75 g (91,4%) H-Trp-D-Ade-Asp-Phe-NH2 • HCl-ot kapunk, olvadáspont 205—207 °C (bomlik), Rf = 0,45, [a]D = —23,1° (c = 1,0, dimetil-formamidban).

6. lépés

terc-Butil-oxi-karbonil-amino-oxi-acetil-L--triptofrl-2-D-amino-dekanoil-L-aszparagil-L-fenil-alanin-amid

0,69 g (1,02 mmól) H—Trp—D—Ade—Asp—Phe-NH2 - HCl-ot és 0,45 g (1,10 mmól) BOC-OGly—OPCP-t (1. példa, 9. lépés) 0,42 ml (3,0 mmól) trietil-amin jelenlétében 10 ml DMF-ban reagáltatunk. Másnap a reakcióelegyet vákuumban bepároljuk, a maradékot vízzel megszilárdítjuk, a szuszpenziót szűrjük, a csapadékot vizzel és éténél mossuk. A 0,63 g nyersterméket a szokásos módon 10. futtatóeleggyel szilikagélen oszlopkromatografáljuk. így 0,45 g BOC—OGly-Trp-D—Ade—Asp— Phe—NH2-ot kapunk, olvadáspont: 162—165 °C (bomlik), Rf = 0,60, R^ú=0,40, [a]D=-17,6°

(c = l,0, dimetil íormamidban).

Elemzési eredmények a C41H57O10N7 összegképlet (molekulasúly: 808,01) alapján:

számított: C =60,95%, H=7,ll%,

N = 12,13%,

talált: C =60,71%, H = 7,20%,

N = 12,12%.

Szabadalmi igénypont:

Eljárás az I általános képletű peptidek

A—Trp-B—Asp—Phe-NH-Y (I)

valamint azok savaddíciós sóinak — ahol

A terc-butil-oxí-karbonil-amino-oxi-Ac-, benzil-oxi-karbonil-amino-oxi-Ac- vagy amino-oxi-Ac-csoportot jelent, ahol Ac jelentése valamely 1 —5 szénatomos, egyenes vagy elágazó láncú alkánkarbonsav acilgyöke, amelyhez az adott esetben védett amino-oxi-csoport az a- vagy ß-helyzetben kapcsolódik, B L-metionil-, L-leucil-, L-norleucil-, L-norvalil-, L-2-amino-dekanoil-csoportot és Y hidrogénatomot vagy karboxi-metoxi-csoportot jelent —

előállítására, azzal jellemezve, hogy valamely II általános képletű tetrapeptid-amidot

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

15