175152. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új amino-oxi-savakat tartalmazó, gasztrin-hatású peptidek előállítására
23 175152 24 4,63 g (22,5 mmól) diciklohexil-karbodiimidet. A szuszpenziót 1 órán keresztül hidegen állni hagyjuk, majd leszűrjük. A szűrletet vákuumban bepároljuk, 50 ml n-hexánban feloldjuk és 20—20 ml 5%-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal ötször, majd 20—20 ml vízzel kétszer kirázzuk. A szerves oldószert szárítás után vákuumban lepároljuk, a maradék olajszerű anyag hidegen megszilárdul. így 8,12 g (91%) BOC-Nle-OPFP-t kapunk, olvadáspont: 55-57 °C, [a]D = -26,8° (c = 1,0, dioxánban) R* =0,80, Rf = 0,85. Elemzési eredmények a Ci7H2o04NF5 összegképlet (molekulasúly: 397,35) alapján: számított: C =51,39%, H =5,07%, F =23,91%, talált: C =51,51%, H =4,68%, F =24,06%. 2. lépés N-terc-Butil-oxi-karbonil-L-norleucil-L-aszparagjl-/3-(terc-butil-észter)-L-fenil-alanin-amid 1,68 g (5,0 mmól) H—Asp(OlBu)—Phe—NH2-ot (1. példa, 4. lépés) és 2,2 g (5,5 mmól) BOC—Nle—OPFP-t (10. példa, 1. lépés) 10 ml DMF-ban oldunk 0,70 ml (5,0 mmól) trietil-amin jelenlétében. A reakcióelegyet 3 óra múlva vákuumban bepároljuk, a maradék szilárd anyagot éterrel hidegen szűrjük. így 2,23 g (81,8%) BOC-Nle-Asp(OtBu)-Phe-NH2-ot kapunk, olvadáspont: 164-165 °C. Kis mintát etil-acetátból átkristályosítunk, olvadáspont: 165-167 °C, R* = 0,70, [a]D =-2,2°, (c = 1,0, dimetil-formamidban). Elemzési eredmények a C28H4407N4 összegképlet (molekulasúly: 548,66) alapján: számított: C =61,29%, H =8,08%, N = 10,24%, talált: C =61,34%, H=7,70%, N = 10,40%. 3. lépés L-Norleucil-L-aszparagil-L-fenil-alanin-amid-hidroklorid 1,90 g (3,47 mmól) BOC—Nie—Asp(0*Bu)—Phe—NH2-ot 15 ml 4n sósavas ecetsavban oldunk. 1 óra elteltével a reakcióelegyet vákuumban bepároljuk, a szilárd maradékot éterrel szűrjük. így 1,48 g (98%) H-Nle-Asp-Phe-NH2 • HCl-ot kapunk, bomláspont: 195 °C, [a]D=-15,4° (c=l,0, dimetil-formamidban), Rj = 0,35. 4. lépés N-terc-Butil-oxi-karbonil-L-triptofil-L-norleucil-L-aszparagil-L-fenil-alanin-amid 1,35 g (3,15 mmól) H-Nle-Asp-Phe-NH2 •- HCl-ot és 1,26 g (3,15 mmól) BOC-Trp-OSu-t 0,88 ml (6,3 mmól) trietilamin jelenlétében feloldunk 40 ml DMF-ban. A reakcióelegyet másnapig keverjük, majd vákuumban bepároljuk, és a maradék olajszerű anyagot kevés ecetsavat tartalmazó vízzel megszilárdítjuk. A szuszpenziót hidegen szűrjük, vízzel, majd éterrel mossuk. így 1,92 g (89,7%) BOC-Trp-Nle-Asp—Phe-NH2-ot kapunk, bomláspont: 196 °C. [a]D =—28,8° (c=l,0, dimetil-formamidban), Rf = 0,50. A terméket további tisztítás nélkül használjuk fel. 5. lépés L-Triptofil-L-norleucil-L-aszparagil-L-fenil--alanin-amid-hidroklorid 1,85 g (2,73 mmól) BOC—Trp—Nie—Asp—Phe-NH2 -ot 50 ml 8 n sósavas dioxánnal kezelünk. 1 óra múlva az oldatot vákuumban bepároljuk, a gélszerű maradékot acetonnal szűrjük. így 1,17 g (69,7%) H—Trp—Nie—Asp-Phe—NH2 • HCl-ot kapunk, bomláspont: 235 °C, [a]D = —28,4°, .[irodalom: J. S. Morley és J. S. Smith, J. Chem. Soc. C 726 (1968)] bomláspont: 235 °C, [a]D = -28,3° (c = l,0, dimetil-formamidban), R/ =0,55. 6. lépés 2-D-(terc-Butil-oxi-karbonil-amino-oxi)--propionil-L-triptofil-L-norleucil-L--aszparagjl-L-fenil-alanin-amid 1,0 g (1,62 mmól) H—Trp—Nie—Asp—Phe-NH2 - HCl-ot és 0,74 g (1,62 mmól) BOC-D-OAla-OPCP-t (5. példa, 4. lépés) 0,68 ml (4,86 mmól) trietil-amin jelenlétében 10 ml DMF-ban reagáltatunk. Másnap a reakcióelegyet vákuumban bepároljuk, a gélszerű maradékot éterrel szűrjük, majd éterrel és vízzel mossuk. Az 1,36 g nyersterméket 10. futtatóeleggyel a szokásos módon szilikagélen oszlopkromatografáljuk. A tiszta frakciókat vákuumban bepároljuk, és a szilárd maradékot 50%-os vizes etanollal szűrjük. így 0,25 g BOC—D—OAla —Trp—Nie—Asp—Phe—NH2 -ot kapunk, olvadáspont: 217 —218 °C (bomlik) R| = 0,30, Rf0 = 0,15, [a]D = +4,3° (c=l,0, dimetil-formamidban). Elemzési eredmények a C38HSiOioN7 összegképlet (molekulasúly: 765,88) alapján: számított: C =59,59%, H =6,71%, N =12,80%, talált: C =59,40%, H =6,55%, N =12,83%. 11. példa 1. lépés N-terc-Butil-oxi-karbonil-L-norvalin-pentafluor-fenil-észter 8,0 g (20 mmól) BOC-Nva-OH • DCHA-sót 60 ml éter és 20 ml 2 n kénsav-oldat között rázva oldunk, majd az éteres oldatot 20 ml 2 n kénsav-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 12
