175151. lajstromszámú szabadalom • Eljárás fenilglicint tartalmazó, gasztrin hatású peptidek előállítására
21 175151 22 5. lépés N-terc-Butil-oxi-karbonil-L-triptofrl-L--norleucil-L-aszparagil-D-fenil-glicin-amid 1,57 g (3,78 mmól) H-Nle-Asp-D-Phg-NH2 • • HCl-ot és 1,52 g (3,78 mmól) BOC-Trp-Osu-t 1,06 ml (7,6 mmól) trietilamin jelenlétében 50 ml DMF-ban reagáltatunk. Másnap a reakcióelegyet vákuumban bepároljuk, a maradékot vízzel szűrjük, így 2,45 g (97,5%) BOC—Trp—Nle-Asp—D—Phg—NH2-ot kapunk, olvadáspont: 217 °C (bomlik), Rf = 0,35, [a]D = —32,7° (c = 1,0, dimetilformamidban). Elemzési eredmények a C34H44O8N6 összegképlet (molekulasúly: 664,77) alapján: számított: C =61,43%, H =6,67%, N = 12,64%, talált: C =61,41%, H =6,86%, N = 12,65%. 6. lépés L-Triptofll-L-norleucil-L-aszparagil-D-fenil-glicin-amid-hidroklorid 2,20 g (3,32 mmól) BOC—Trp—Nie—Asp—D—Phg—NH2 -ot 25 ml 4 n sósavas dioxánnal kezelünk 1,20 ml (17 mmól) merkapto-etanol jelenlétében. 15 perc után az oldatot vákuumban bepároljuk, a maradékot éterrel megszilárdítjuk, és szűrjük. így 1,99 g (99,0%) H-Trp-Nle-Asp-D-Phg—NH2 • HCl-ot kapunk, olvadáspont: 217—221 °C (bomlik), Rf =0,35, [a]D =-54,2° (c= 1,0, dimetilformamidban). 7. lépés D-2-(terc-Butil-oxi-karbonil-amino-oxi)-propionil-L-triptofil-L-norleucil--L-aszparagil-D-fenil-glicin-amid 1,80 g (3,0 mmól) H—Trp—Nie—Asp—D—Phg-NH2 • HCl-ot és 1,36 g (3,0 mmól) BOC-D—OAla—OPCP-t (3. példa, 1. lépés) 1,26 ml (9,0 mmól) trietilamin jelenlétében 30 ml DMF-ban reagáltatunk. Másnap a reakcióelegyet vákuumban bepároljuk, a maradékot vízzel szűrjük. A csapadékot vízzel és a szokásos módon szilikagél oszlopon kromatografáljuk. így 0,99 g BOC-D—OAla—Trp—Nie—Asp—D—Phg—NH2-ot kapunk, olvadáspont: 211 -212 °C (bomlik) Rfs=0,35, Rj°=0,25, [a]D = —22,8° (c= 1,0, dimetilformamidban). Elemzési eredmények a C37H49O10N7 összegképlet (molekulasúly: 751,85) alapján: számított: C =59,11%, H =6,57%, N = 13,04%, talált: C =59,10%, H =6,30%, N = 13,21%. 1. lépés N-terc-Butil-oxi-karbonil-L-norvalinpentafluor-fenil-észter 8.0 g (20 mmól) BOC-Nva-OH • DCHA sót 60 ml éter és 20 ml 2 n kénsav oldat között rázva oldunk, majd az éteres oldatot 20 ml 2 n kénsav-oldattal és vízzel mossuk, szárítjuk, és vákuumban bepároljuk. A maradék olajat 3,70 g (20 mmól) pentaíluor-fenollal együtt 25 ml etil-acetátban oldjuk. Az oldatot 0 °C-on 3,92 g (19 mmól) DCC-del reagáltatjuk egy órán keresztül. Ezután a szuszpenziót leszűrjük, a szűrletet vákuumban bepároljuk, a maradék olajat 50 ml n-hexánban oldva ötször 20 ml 5%-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, majd kétszer 20 ml vízzel mossuk. Az oldatot vákuumban bepároljuk, a maradék olajszerű anyag hidegen kikristályosodik. így 6,21 g (81%) BOC—Nva—OPFP-t kapunk, olvadáspont: 60—62 °C, Rf = 0,70, [a]D = -32,3° (c = 1,0, dioxánban). Elemzési eredmények a C16Hi804NF5 összegképlet (molekulasúly: 383,32) alapján: számított: C =50,14%, H =4,73%, F =24,78%, talált: C =50,06%, H =4,64%, F =24,63%. 2. lépés N-terc-Butil-oxi-karbonil-L-norvalil-L-aszparagü-(3-(terc-butil-észter)-D-fenil-glicin-amid 1,60 g (5,0 mmól) H-Asp(0*-Bu)-D-Phg—NH2-ot (9. példa, 2. lépés) és 1,91 g (5,0 mmól) BOC—Nva—OPFP-t 0,70 ml (5 mmól) trietilamin jelenlétében 10 ml DMF-ban reagáltatunk. Másnap a reakcióelegyet vákuumban bepároljuk, a maradékot éterrel szűrjük. így 2,36 g (87,4%) BOC-Nva—Asp—(OlBu)—D—Phg—NH2-t kapunk, olvadáspont: 200-202 °C, Rf = 0,75, [a]D = -66,7° (c = 1,0, dimetilformamidban). Elemzési eredmények a C26H40O7N4 összegképlet (molekulasúly: 520,61) alapján: számított: C = 59,98%, H = 7,74%, N = 10,76%, talált: C =60,08%, H =7,68%, N = 10,96%. 3. lépés L-Norvalil-L-aszparagil-D-fenil-glicin-amid-hidroklorid 2.0 g (3,84 mmól) BOC—Nva—Asp—(0*Bu)—D—Phg—NH2 -ot 15 ml 4 n sósavas ecetsavval kezelünk. 1 óra elteltével a szuszpenziót éterrel felhígítjuk, és hidegen szűrjük. így 1,52 g (98%) H-Nva— Asp—D—Phg—NH2-at kapunk, olvadáspont: 204 rfC (bomlik), Rf7=0,15, [a]D =-58,0° (c=l,0, dimetilformamidban). 10. példa 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 11
