175151. lajstromszámú szabadalom • Eljárás fenilglicint tartalmazó, gasztrin hatású peptidek előállítására
3 175151 4 vegyületek hatása mind kisebb, mint a Peptavlon készítményé. Az a-(amino-oxi)-karbonsavat tartalmazó peptidek számos fehérjebontó enzimmel szemben ellenállóak [L. Kisfaludy, M. Löw, T. Dévényi: Acta Biochim. Biophys. Acad. Sei. Hung., 6., 393. (1971)]. Az aminovégen a-(amino-oxi)-karbonsavat tartalmazó ACTH-analógok nyújtott hatása például valószínűleg annak tulajdonítható, hogy az aminovégi a-(amino-oxi)-acil-csoport megvédi a molekulát az aminopeptidáz-típusú enzimek támadása ellen (167 655 számú magyar szabadalmi leírás). Azt találtuk, hogy az aminovégen (amino-oxi)-karbonsavat tartalmazó pentagasztrin-analógok igen hatásos vegyületek, különösen hatásosak az (amino-oxi)-acetil-, az L- és -D-(a-amino-oxi)-propionil-származékok. Ezek hatása egyes származékoknál felülmúlja a Peptavlonét. A találmány értelmében úgy állítjuk elő az A-Trp-B-Asp-Phg-NH2 (I) I általános képletű vegyületeket, hogy valamely II általános képletű H-Trp-B-Asp-Phg-NH2 (II) tetrapeptidamidot — ahol B a fenti jelentésű és a Phg-csoport L- vagy D-konfigurációjú lehet - valamely A-X általános képletű, (amino-oxi)-alkánkarbonil-csoportot tartalmazó vegyülettel reagáltatunk, ahol A jelentése megegyezik a fenti meghatározás szerintivel, X hidroxilcsoportot, halogénatomot, előnyösen klóratomot, pivaloil-oxi-csoportot, R—0—C02- -csoportot képvisel, ahol R jelentése rövidszénláncú alkilcsoport, előnyösen etil- vagy izobutilcsoport, X jelentése továbbá adott esetben nitrocsoporttal vagy egy vagy több halogénatommal helyettesített fenoxiesoport, előnyösen p-nitro-, 2,4,6-triklór-, 2,3,5-triklór-, pentaklór- vagy pent a f 1 u or-fenil-oxi-csoport, N-szukcinimid-oxi-csoport -X=OH esetében az acilezést előnyösen diciklohexil-karbodiimid segítségével végezzük. Az A—X általános képletű reakcióképes vegyület előnyösen pivalinsawal vagy szénsavfélészterrel készített vegyes anhidrid vagy aktív észter lehet. Az utóbbiak közül különösen előnyösen alkalmazhatjuk a halogénezett fenilésztereket, elsősorban a pentaklór- és pentafluorfenilésztert. A kiindulási anyagként alkalmazott H-Trp—B-Asp-Phg-NH2 általános képletű tetrapeptidamidot önmagában ismert módon, fragmenskondenzációval vagy lépésenkénti lánchosszabbítással állíthatjuk elő azidos, vegyes anhidrides, diciklohexil-karbodiimides, aktív észteres vagy egyéb ismert aktiválási módszerrel. A reakcióban részt nem vevő funkciós csoportokat szükség esetén védjük, különösen hidrolízissel, acidolízissel vagy katalitikus hidrogenolízissel eltávolítható csoportokkal. A karboxilcsoportot például benzil-alkohollal, terc-butanollal vagy p-klór-benzil-alkohollal észterezve védhetjük. Az amino-oxi- és az amínocsoport védelmére formil-, tozil-, tritil-, trifluor-acetil-, o-nitro-szulfenil-, ftalil-, p-klór-benzil-oxi-karbonil-, de különösen benzil-oxi-karbonil- és terc-butil-oxi-karbonil-csoportot használhatunk. A triptofán indolvázának nitrogénatomja esetenként formilcsoporttal védhető. A védőcsoportok megfelelő kombinációjával el tudjuk érni, hogy ezek önmagukban ismert módszerek (például hidrolízis, acidolízis, katalitikus hidrogenolízis) segítségével szelektíven vagy egyidejűleg eltávolíthatók legyenek. Az eljárás egyik előnyös kiviteli módja szerint az aminovégi védett (amino-oxi)-acil-csoport beépítésére a pentahalogén-fenil-észteres eljárást használjuk, az aktív észtert reagáltatjuk a karboxilvégi H—Trp—B—Asp—Phg—NH2-dal. Ennek szintéziséhez Z-L-Phg-OH-ból vagy Z-D-Phg-OH-ból indulunk ki, és önmagában ismert módszerrel elkészítjük a Z-L-Phg-NH2 -t vagy a Z-D-Phg-NH2-t, majd a védőcsoport eltávolítása után lépésenként védett aminosav-(N-hidroxi-szukcinimid)-észterekkel vagy -(pentahalogén-fenil)-észterekkel építjük fel a karboxilvégi H—Trp—B—Asp—D—Phg—NH2 vagy H-Trp-B-Asp-L-Phg-NH2 tetrapeptidamidot. A Z védőcsoport eltávolítására jégecetes hidrogénbromidot vagy katalitikus hidrogenolízist használunk. A Z védőcsoport helyett használhatunk BOC-csoportot is, amely enyhébb savas kezeléssel távolítható el. Az aszparaginsav 0-karboxilcsoportját védő észterkötést dipeptid-, tripeptid- vagy tetrapeptid-fázisban hasíthatjuk szelektíven vagy az aminovédő csoporttal együtt. A lehasítás mindkét esetben acidolízissel vagy katalitikus hidrogenolízissel történhet. A végtermékek tisztítása egyszerű kristályosítással, átcsapással, szilikagéles oszlopkromatográfiával vagy karboxi-metil-cellulózos ioncserélő kromatográfíával végezhető el. A találmány szerinti új vegyületek biológiai hatását Ghosh és Schild [Br. J. Pharmac. Chemoth. 13., 54. (1958)] valamint Lai [Gut 5., 327. (1964)] módszerével vizsgáltuk figyelembe véve Pissidis és Clark módosítását [Gut 8., 196. (1967)]. Az állatkísérletek szerint az új vegyületek vénába adva jelentősen fokozzák a savtermelést. Különösen figyelemreméltó, hogy — a Peptavlonnal ellentétben — az új vegyületek felszívódnak a vékonybélből is, és 20 üg/100 g testsúly dózisban savtermelést fokozó hatásuk esetenként nagyobb, mint a 0,2 üg/100 g dózisban vénába adott kontroll Peptavloné, amely nagyobb dózisban sem fokozza a savtermelést enterális bejuttatása esetén. Ugyancsak figyelemreméltó néhány származék végbélből felszívódva kifejtett nagy sav szekréció fokozó hatása Mind a vékonybélből, mind a végbélből felszívódva a hatás mértéke lehetőséget ad a vegyületek újfajta alkalmazási módjára. Az új vegyületek felszívódnak a végbélből is, és hatásuk esetenként nagyobb, mint a kontrollként alkalmazott Peptavloné. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
