174883. lajstromszámú szabadalom • Eljárás antigén kinyerésére és az antigént tartalmazó reagenskészítmény előállítására
13 174883 14 burg, New York állam) Amerikai Egyesült Államok-beli cég] levő, 18 mm átmérőjű kör határvonalán belül 0,05 ml szérumot és a 3. példában előállított antigén-reagenskészítményből 1/60 m!-t szórunk ki. A kártyát ezután klinikai rotátorral [sebessége 130 fordulat/perc] 8 percen át forgatjuk. Pozitív reakció esetében beeső fénysugár alatt világoskék aggregátumok észlelhetők, ha a szérumban antitestek vannak jelen. Negatív akkor a reakció, ha a reagens nem aggregálódik diszkrét részecskékre, hanem homogén szuszpenzió marad. 5. példa Az alábbiakban Neisseria gonorrhoeae fertőzések in vitro kimutatására alkalmas vizsgálókészletet ismertetünk. A vizsgálókészlet 500 meghatározáshoz szükséges anyagot tartalmaz. Minden egyes vizsgálókészlet az alábbi komponenseket tartalmazza: 10 ml antigén-reagenskészítmény 1 ml aktív kontrollszérum 1 ml gyengén aktív kontrollszérum 1 ml inaktív kontrollszérum 35 teszt kártya 500 mintavevő kémcső A vizsgálat végrehajtásához szükséges anyagok könnyen hozzáférhetően vannak elhelyezve a vizsgálókészletben, amelynek olyan a kialakítása, hogy minimális térfogatú legyen. A hűtést igénylő komponensek el lehetnek különítve, a szobahőmérsékleten tárolhatóktól. A vizsgálatot végző laboratóriumnak rendelkezésre kell bocsátani egy 130 fordulat/perc sebességre | beállítható mechanikai rotátort és egy fluoreszcens asztali lámpát két 15 wattos izzóval. Javasoljuk az antigén-reagenskészítmény hűtését. Ha az antigént 2-10 °C-on tároltuk, akkor több mint 6 hónapon át használható a vizsgálókészlet. Ügyelnünk kell arra, hogy az antigént ne érje erős napfény, azaz ne melegedhessen fel. Felhasználása előtt az antigént szobahőmérsékletre (22-26 °C) melegedni hagyjuk. A közvetlenül a hűtőszekrényből való eltávolítás után felhasznált antigén ugyanis nem olyan érzékeny, mint a kedvezően felmelegített antigén. A napi kísérlet befejezése után az antigén kihordására szolgáló tű hegyét a tű lyukát befedő gumi-borítósapkával fedjük, illetve az antigén-reagenskészítményt tartalmazó palackot lezárása után hűtőszekrényben helyezzük. Közelebbről a vizsgálókészlet egyes komponenseinek kialakítása az alábbi: Antigén-reagenskészítményt tároló palack Az antigén-reagenskészítményt tartalmazó palack olyan zárótetővel van ellátva, amelynek a tetőn levő nyíl irányában való elforgatásakor rugóval rögzített tű szabadul fel és átszúr egy diafragmát. Az antigén-reagenskészítményt tartalmazó rendszer így felhasználásra kész. Teszt kártya Az ebben a kísérletben használt kísérleti kártyának olyan műanyag bevonata van, amely lehetővé teszi az antigén-szérum keverék egyenletes szétterülését a kísérleti területen és megakadályozza a szérum abszorbeálódását a kártya által. A kártyákat szélükhöz közel szabad csak megfognunk úgy, hogy ujjaink ne érintsék a kísérleti területeket, mert az ujjakról odajutó zsír gátolja a kísérleti terület tökéletes kihasználását. Mintavevő cső A mintavevő csövet szűrővizsgálat végrehajtásakor a szérum tárolására, illetve a vizsgált egyedtől a vizsgálóhelyre való juttatásra használjuk. Úgy van kialakítva, hogy mintegy 0,05 ml szérumot tároljon. Felhasználhatatlan mintavevő csövet használunk minden új vizsgálathoz. Mechanikai rotátor E kísérlet céljaira megfelel egy, a VDRL-teszt [lásd a United States Department of Health. Education and Welfare (az Amerikai Egyesült Államok Egészségügyi Minisztériuma) 1969-ben megjelent „Serologic Test for Syphilis” című kiadványát] végrehajtásához használt rotátor, feltéve, hogy sebessége beállítható 130 fordulat/perc értékre. A rotátorral szemben további működtetésű követelmény: a rotátor lapja vízszintes síkban mintegy 19 mm átmérőjű kört írjon le. A kiértékeléshez szükséges fényforrás Világos fényforrás, például egy fluoreszcens asztali lámpa két 15 wattos körtével, vagy pedig nagy intenzitású fény felel meg erre a célra. Legtöbbször mindegyik reakció látható egy jól megvilágított laboratóriumban rendelkezésre álló fénnyel, azonban kis mértékű reakciókat nem vehetünk észre, ha nem használunk megfelelő megvilágítást. Kontrollszé rumok Feltétlenül javasoljuk kontrollszérumok használatát az antigén-reagenskészítmény aktivitásának vizsgálata céljából. A használt szérumok az alábbiak: Aktivitás nem aktív enyhén aktív erősen aktív Szérum Vénapunkció útján vért veszünk tiszta, száraz kémcsőbe, majd megalvadni hagyjuk. Szükséges esetben a mintát kellő sebességgel centrifugáljuk ahhoz, hogy a sejtrészek kiülepedjenek. A szérumot ezután az alvadéktól elválasztjuk, majd tiszta, száraz kémcsőbe töltjük. Közvetlenül vizsgálat előtt 0,5 órán át 62-63 °C-on tartjuk. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 7
