174883. lajstromszámú szabadalom • Eljárás antigén kinyerésére és az antigént tartalmazó reagenskészítmény előállítására
15 174883 16 Kísérleti leírás 1. Műanyagból készült mintavevő csövecskét lezárt végéhez közel hüvelykujjunk és mutatóujjunk közé fogunk, majd összenyomjuk a csövecskét és nyitott végével a mintába dugjuk. Ezután megszüntetjük az ujjainkkal gyakorolt nyomást, amikoris a csövecskébe minta szívódik fel. E művelet során vigyáznunk kell arra, hogy ne kavarjuk fel az alvadékot, illetve a kiülepedett anyagot, 2. Ezután a műanyagból készült csövecskét függőleges helyzetbe hozzuk a kísérleti kör felett úgy, hogy ne érjen a kártya felületéhez. Ekkor összenyomjuk a csövecskét és egy cseppet a kísérleti területre cseppenni hagyunk. A megmaradt mintát visszaöntjük a mintatároló csőbe. 3. Ezután megfordítjuk a műanyagból készült csövecskét, és lezárt végével a mintát szétterítjük a kísérleti kör határán belül. 4. Az antigén-reagenskészítményt tartalmazó palackot felhasználása előtt enyhén rázzuk, majd függőleges helyzetbe hozzuk és 3 cseppet a teszt kártya egyik sarkára cseppentünk. Ezután minden egyes kísérleti területre egy-egy szabadon eső cseppet juttatunk. Végül a kártyát egyik sarkánál fölemeljük. 5. Ezután a mintát nedvességtartó védőborítás (ami nem más, mint egy 12-szer 15-ször l,5mm-es polisztirol borító, amelynek belsejébe megnedvesített poliuretán habdarabot rögzítünk) alatt mechanikai rotátorra helyezzük, majd 130 fordulat/perc sebességgel 8 percen át forgatjuk. 6. Ezt követően a mintát világos fényben megvizsgáljuk. Erősen vagy közepesen aktív szérumok esetében világoskék aggregátumok észlelhetők. Kevéssé vagy minimálisan aktív szérumot úgy detektálunk, hogy a minta cseppjét ide-oda mozgatjuk a kicsiny aggregátumok megfigyelése céljából. 7. Értékelés: Pozitív az eredmény, ha a kontrollszérumhoz képest bármiféle jellemző rögösödés észlelhető, míg negatív, ha semmiféle rögösödés vagy durvaság nem észlelhető. 6. példa Neisseria gonorrhoeae antigénre in vivo adott antitestreakció Két New Zealand törzsbeli fehér nyulat (súlyuk egyenként 2,5 kg) kezeltünk szubkután oltás útján enzimes lebontásnak alávetett Neisseria gonorrhoeae antigénnel. Az oltóanyagot felhasználása előtt 0,85%-os nátrium-klorid-oldattal szemben dializáltük. Ezután az antigén-készítményből 0,5 ml-t adtunk be szubkután osztott dózisban több helyen, így az állatokban antitestreakciót indítottunk. A végső oltás után 14 nappal az állatok vérszérumát megvizsgáltuk enzimes lebontásnak alávetett Neisseria gonorrhoeae antigént hordozó koleszterin-lecitin részecskéket használva. A legmagasabb titer-érték, vagyis a szérumnak az a legnagyobb hígítása, amely az antigénnel látható reakciót adott, 1 :128 volt. 7. (összehasonlító példa) Az alábbiakban ismertetjük egy olyan kísérletsorozat eredményeit, amelynek során Neisseria gonorrhoeae kimutatására számos különböző szerológiai vizsgálat került elvégzésre. E vizsgálatokat egy független tudományos intézmény, mégpedig a Provincial Laboratory of Public Health, The University of Alberta (Edmonton, Alberta) kanadai intézmény végezte. Az alábbiakban közölt táblázat adataiból kitűnik, hogy a találmány értelmében végzett kimutatási vizsgálat (amelyet az egyszerűség kedvéért itt GST-nek jelölünk) kedvezőbb, mint a többi vizsgált vizsgálati módszer, tekintettel arra, hogy segítségével helyesen identifikálható akut gonococcusos fertőzésben szenvedő betegek több, mint 70%-a. A GST ugyanakkor 95%-ban helyes eredményeket ad olyan betegek esetében, amelyek Neisseria gonorrhoeae-ra nézve úgynevezett kulturnegatívok (azaz nem akut fertőzésben szenvednek). A felületi antigén kimutatásának lehetősége olyan vizsgálati módszerekkel, amelyek N. gonorhoeae elroncsolt sejtjeiből származó antigént hasznosítanak Kísérleti módszer (C) Százalékos kimutatás (A) akut esetekben Százalékos kimutatás (B) nem akut esetekben GST 70,4 94,6 MHA 35,7 92,6 CFT 67,6 92,8 Dri Dot 59,5 91,0 A. Kísérlet specifikussága A kísérleti csoport az alábbi kritériumoknak felel meg: 1. Korábbi gonococcusos fertőzésen nem esett át. 2. Pozitív gonococcusos tenyészetet ad az alabbi helyek bármelyikéből vett tenyészettel: méhnyak, végbél, garat és húgycső. B. Kísérlet specifikussága A kísérleti csoport az alábbi kritériumoknak felel meg: 1. Csak kevéssé veszélyeztetett betegek széruma lett vizsgálva. 2. Korábban gonococcusos fertőzésen nem estek át. . . , «1 3. N. gonorrhoeae-ra mindegyik említett helyről vett mintával készült tenyészet kultumegatív. 4. Gonorrhoeának semmiféle klinikai manifesztációja nem észlelhető. 5. A betegek nem szedtek antibiotikumot, amikor a vérszérumból mintát vettek, illetve a tenyésztést végezték. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 8
