174764. lajstromszámú szabadalom • Eljárás enzimatikus és biokémiai reakciók vizsgálatára
MAGYAR népköztársaság SZABADALMI LEÍRÁS 174764 £ Bejelentés napja: 1976. X. 6. (KA-1474) Elsőbbsége: Svédország: 1975. X. 6. (75.11148—4) Nemzetközi osztályozás : GOIN 33/16 ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL Közzététel napja: 1979. IX. 28. Megjelent: 1980. VIII. 31. Feltalálók: Szabadalmas: Arwin Hans Rune fizikus, Västra Frölunda, Aktiebolaget Kabi, Lundström Ingemar Kurt fizikus, Göteborg, Stockholm, Svédország Svédország Eljárás enzimatikus és biokémiai reakciók vizsgálatára 1 A találmány tárgya eljárás enzimatikus vagy más olyan biokémiai reakciók vizsgálatára, ahol a biokémiai reakció szempontjából érzékeny szubsztrátummal reagáló anyag aktivitását vagy koncentrációját kell meghatározni. A találmány szerinti eljárás használható például enzimek, különösen szerin-proteázok (trombin, plazmin, tripszin stb.) aktivitásának meghatározására. Ezek közül egyesek a vér koagulációját és a fibrinolízist szabályozzák, ezért vérzés vagy trombózis következik be, ha ezek mennyisége eltér a szervezetben szokásos mennyiségtől. Az eljárás használható immunológiai reakciók, így az antigén-antitest kötődés tanulmányozására is. Hasonlóképpen alkalmas az eljárás inhibitor-enzim, receptor-hormon és receptor-szteroid kötődés vizsgálatára. Az enzimreakciókat ismert módon az úgynevezett enzimelektródokkal tanulmányozzák, ahol membránokon feszültségkülönbséget mérnek, amely a reakcióban keletkező termékekre jellemző. (Gough D. A. és Andrade J. D., Enzyme Electrodes, Science Vol. 180. pp 380-384.) Az immunológiai reakciók vizsgálatában ismeretes a nikkellel bevont üveglemezek használata. Ezekre a lemezekre antigéneket adszorbeáltatnak, amelyek azok felületén réteget képeznek. Amikor az üveglemezt antitesteket tartalmazó oldatba merítik, kötés jön létre az antigének és az antitestek között, és így a réteg vastagabb lesz. A kötést tehát a réteg vastagságának ellipszométeres optikai mérésével lehet kimutat- 174764 2 ni. (Rothen A., Immunologie and enzymatic reactions carried out at a solid-liquid interface, Physiol. Chem. and Physics 5,1973.) Ismeretes továbbá az enzimaktivitás koduktomet- 5 riás módszerrel való meghatározása. (Lawrence A. J. and Moores G. R., Conductrometry in Enzyme Studies, Eur. J. Biochem 24 (1972), pp. 538—546.) Ismeretes az is, hogy szerves molekulák adszorbeálódnak az elektródok felületén, és megváltoztatják 10 az elektródok elektromos tulajdonságait (Bockris J. O’M. and Reddy A. K. N., Modern Elektro chemistry, Plenum Press, Vol. 2, chap 7.) Kifejlesztettek olyan anyagokat is, különösen amid-típusú szubsztrátumokat, amelyek a vizsgálandó 15 enzimekre igen érzékenyek és az enzim jelenlétében kromofór termékek képződése közben hidrolizálódnak. A színváltozás könnyen mérhető spektrofotometriásán, pl. egy optikai abszorpciós spektrométerrel. A 3 884 896 számú USA szabadalmi leírás egy 20 olyan szubsztrátumot ismertet, amely alkalmas enzimaktivitás optikai kimutatására, és amelynek révén klinikai vizsgálatot lehet végezni például antitrombin és protombin mennyiségének meghatározására. Az optikai módszer hátránya, hogy igen bonyolult 25 és drága berendezést igényel, azonfelül igen nagy mennyiségű szubsztrátumra van szükség a mérés elvégzéséhez. Az optikai módszer nem alkalmas az enzimaktivitásnak a vérben való közvetlen vizsgálatára, mert a vér zavarossága gátolja a vizsgálatot. A kőzvet- 30 len vizsgálat helyett oly módon kell dolgozni, hogy a
