174649. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új kalcitonin-származék előállítására
15 174649 16 konyrétegkromatografálással egyetlen foltot kapunk. R5 = 0,46. [a]2^ = —18,27° (c=l, dimetilformamid). 9) B OC-Thr(Bzl)-Asp(OBzl)-Val-Gly-Ala-Gly-Thr(Bzl)-Pro-NH2 7,2 g BOC-Asp(OBzl)-Val-Gly-Ala-Gly-Thr(Bzl)-Pro-NHo -hoz -5°-on hozzáadunk 30 ml trifluorecetsavat, 30 percig keveijük, majd vákuumban bepároljuk. A maradékhoz dietilétert adunk, és a kivált csapadékot nátriumhidroxidon vákuumban szárítjuk. Az így kapott termékhez 15 ml dimetilformamidot adunk, és a pH-t trietilamin hozzáadásával 7,5-re állítjuk be. Ezután 100 mg 1-hidroxibenzotriazolt és 4,0 g BOC-Thr(Bzl)-OSU-t adunk hozzá, a pH-t N-metilmorfolinnal helyesbítjük, és 2 napig szobahőmérsékleten keverünk. A pH-t 3 ml dimetilformamiddal és N-metilmorfolinnal 7,5-re újra beállítjuk, majd éjjelen át tovább keverjük. A reakció befejeződése után a reakciókeverékhez nagy mennyiségű vizet adunk, a kivált csapadékot szűréssel elválasztjuk, és metanol és dietiléter elegyéből háromszor átkristályosítva 6,7 g (77,1 %) cím szerinti vegyületet kapunk. Olvadáspontja 172-188°. Vékony rétegkromatográfiával a 2. és 5. oldószerrendszerek használatával egyetlen foltot kapunk. [ a ]2® = —13,65 ° (c=l, dimetilformamid). 10) AOC-Arg(Tos)-Thr(Bzl)-Asp (OBzl)-Val-Gly-Ala-Gly-Thr(Bzl)-Pro-NH2 6,52 g BOC-Thr(Bzl)-Asp(OBzl)-Val-Gly-Ala- Gly-Thr (Bzl) -Pro-NHi-hoz -5°-on hozzáadunk 20 ml trifluorecetsavat, 30 percig keveijük, majd vákuumban bepároljuk. A maradékhoz dietilétert adunk, és a kivált csapadékot vákuumban nátriumhidroxidon szárítjuk. Ehhez a termékhez 25 ml dimetilformamidot adunk, és -5°-on trietilaminnal a pH-t 5,0-ra állítjuk be. Hozzáadunk 972 mg 1-hidroxibenzotriazolt és 3,2 g AOC-Arg(Tos)-OH-t, majd —5°-on való hűtés közben 1,3 ml N-etil-N-dimetilaminopropil-karbodiimidet csepegtetünk hozzá, és utána 1 óra hosszat -5°-on és éjjelen át szobahőmérsékleten keveijük. A reakciókeverékhez etilacetátot adunk, és a keletkezett csapadékot 400 ml metanol és 50 ml dietiléter forró elegyével, majd 300 ml metanol és 100 ml dietiléter elegyével kezeljük. 7,0 g (82,7%) cím szerinti vegyületet kapunk. Olvadáspontja 187—193° (bomlik). Vékonyrétegkromatográfiával a 2. és 5. oldószerrendszereket használva egyetlen foltot kapunk Rf2 = 0,42. Aminosavelemzés: NH3 1,28; Arg 0,95(1); Asp 1,04(1); Thr 1,50(2); Pro 0,98(1); Gly 1,84(2); Ala 1,00(1); Val 1,01(1). 11) BOC-Tyr(Bzl)-Pro-OBzl 37,6 g BOC-Tyr(Bz!).OH.CHA-t 300 ml etilacetáttal és 120 ml n sósavval összekeverünk, a rétegeket elválasztjuk, és az etilacetátos réteget háromszor vízzel mossuk. A szerves réteget vízmentes nátriumszulfáton szárítva vákuumban bepároljuk, az olajos maradékot 80 ml diklórmetánban feloldjuk, és hozzáadunk 19,3 g H-Pro-OBzl.HCl-et. Ehhez a reakciókeverékhez -5°-on hűtés közben 14,6 ml N-etil-N' -dimetilaminopropil- karbodiimidet adunk, majd -5°-on 1 óra hosszat és szobahőmérsékleten éjjelen át keveijük. A reakciókeveréket vákuumban bepároljuk, és a maradékot 800 ml etilacetáttal és 400 ml n sósavval kirázzuk, és az etilacetátos réteget elválasztjuk. A szerves réteget egymásután kétszer 300 ml n sósavval kétszer 300 ml vízzel, háromszor 300 ml 5 %-os vizes nátriumhidrogénkarbonát-oldattal és kétszer 300 ml vízzel mossuk. A szerves réteget vízmentes nátriumkarbonáton szárítjuk, és vákuumban bepároljuk. A maradékként kapott nyers terméket 400 g kovasavgéllel ■ töltött oszlopon kromatografáljuk, 4:1 arányú kloroform-etilacetát eleggyel eluáljuk, és az eluátumot vékonyrétegkromatografálással azonosítjuk. 43 g olajos BOC-Tyr(Bzl)-Pro-OBzl-t kapunk. rV = 0,88 12) BOC-Thr(Bzl)-Tyr(Bzl)-Pro-OBzl 20 g BOC-Tyr(Bzl)-Pro-OBzl-hez -5°-on hűtés közben hozzáadunk 50 ml trifluorecetsavat, és -5°-on 10 percig és szobahőmérsékleten 50 percig keverjük, majd vákuumban bepároljuk. Az olajos maradékot éjjelen át nátriumhidroxidon szárítjuk, majd 30 ml dimetilformamidot adunk hozzá, és -5°-on trietilamin hozzáadásával a pH-t 7,5-re állítjuk be. Ezután 470 mg 1-hidroxibenzotriazolt és 14,2 g BOC-Thr(Bzl)—OSU-t adunk hozzá, és további 1 óra hosszat —5°-on és szobahőmérsékleten éjjelen át keverjük. A keverés alatt a reakciókeverék pH-ját N-metilmorfolin hozzáadásával 7-en tartjuk. 2 nap múlva 1 ml dimetilaminopropilamint adunk hozzá, és további 2 óra hosszat keveijük, majd vákuumban bepároljuk. A maradékot 500 ml vízzel és 500 ml etilacetáttal kirázzuk, és az etilacetátos réteget elválasztjuk. A vizes réteget 200 ml etilacetáttal újra extraháljuk. Az etilacetátos rétegeket egyesítve, egymás után háromszor n sósavval, háromszor vízzel és háromszor 5 %-os vizes nátriumhidrogénkarbonátoldattal mossuk, majd vízmentes magnéziumszulfáton szárítás után a szerves réteget vákuumban bepároljuk. A maradékot dietiléter és n-hexán elegyéből átkristályosítva, 19,6 g nyers terméket kapunk. Ezt a nyers terméket ugyanilyen oldószerből újra átkristályosítva, 14,4 g (54,9 %) cím szerinti vegyületet kapunk. R2 = 0,67. 13) BOC-Thr(Bzl)-Tyr(Bzl)-Pro-OH 30 ml tetrahidrofuránban feloldunk 14,2 g BOC-Thr(Bzl)-Tyr(Bzl)-Pro-OBzl-t, és -5° -on 15 perc alatt hozzácsepegtetünk 23 ml n nátriumhidroxid-oldatot, majd szobahőmérsékleten 4 óra hosszat keverjük. Az oldat pH-ját n sósavval 7-re állítjuk be, és a tetrahidrofuránt vákuumban ledesztilláljuk. A visszamaradt oldathoz vizet adunk, dietiléterrel mossuk, és a vizes réteg pH-ját n sósavval 2-re állítjuk be, majd kétszer etilacetáttal extraháljuk. Az etilacetátos kivonatot vízzel mossuk, vízmentes magnéziumszulfáton szárítjuk, és vákuumban bepároljuk. A maradékot dietiléter és n-hexán elegyéből átkristályosítva 12 g nyers terméket kapunk. Ezt a nyers terméket etilacetátban feloldjuk, dietilétert adunk hozzá, az oldatot állni hagyjuk, és közben fokozatosan n-hexánt adunk hozzá. 10,5 g (84 %) BOC-Thr(Bzl)-Tyr(Bzl> -Pro-OH-t kapunk. Olvadáspontja 134—136°. Vékonyrétegkromatografálással egyetlen foltot kapunk. Rf‘ = 0,68;Rf4 =0,63. 14) BOC-Tnr(Bzl)-Tyr(Bzl) -Pro-Arg(Tos)-Thr(Bzl)-Asp(OBzl)-Val-Gly -Ala-Gly-Thr(Bzl)-Pro-NH2 : 6,0 g AOC-Arg(Tos)-Thr(Bzl)-Asp(OBzl)-Val-Gly--Ala- Gly-Thr(Bzl)-Pro -NH2-t -5°-on hozzáadunk 20 ml trifluorecetsavhoz, 30 percig keverjük, és csökkentett nyomáson bepároljuk. A maradékhoz dietilétert adunk, és nátrium hidroxidon vákuumban szárítjuk. Ezután 20 ml dimetilformamidot adunk hozzá, a pH-t trietilamin hozzáadásával —5°-on 4,5-re állítjuk be, es 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 8
