174649. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új kalcitonin-származék előállítására
17 174649 18 a reakciókeveréket ezen a hőfokon tartva, 851 mg 1-hidroxibenzotriazolt, 4,2 g BOC-Thr(Bzl) -Tyr(Bzl)-Pro-OH-t adunk hozzá, majd hozzácsepegtetünk 1,2 ml N-etil-N’ -dimetilaminopropil-karbodiimidet, és a keverést —5°-on 1 óra hosszat és szobahőmérsékleten éjjelen át tovább folytatjuk. A reakciókeverékhez 300 ml metanolt és 100 ml dietilétert adunk, a keletkezett csapadékot szűréssel elválasztjuk, és metanol és die - tiléter elegyéből, majd dimetilformamid és dietiléter elegyéből és végül metanol és dietiléter elegyéből összesen háromszor átkristályosítjuk. 5,8 g (71,3 %) cím szerinti vegyületet kapunk. Olvadáspontja 186,5-190° (bomlik). Vékonyrétegkromatografálással egyetlen foltot kapunk (2. és 5. oldószerrendszerekkel). [ a ]2p = —15,86° (c=l, dimetilformamid). Aminosavelemzés: NH3 1,60; Arg 0.92(1); Asp 1,04(1); Thr 2,1(3); Pro 2,08(2); Gly 1,86(2); Val 1,00(1); Tyr 0,91(1). 15) BOC-Gln-Thr(Bzl)-Tyr(Bzl)-Pro — Arg(Tos)-Thr(Bzl)-Asp(OBzl)-Val-Gly-Ala-Gly-Thr(Bzl)-Pro-NH2 20 ml trifluorecetsavhoz —5°-on hozzáadunk 5,4 g BO.C-Thr(Bzl)-Tyr(Bzl)-Pro-Arg(Tos) -Thr(Bzl)-Asp(OBzl)-Val-Gly -Ala-Gly-Thr(Bzl)-Pro-NH2-t, 30 percig keverjük, és vákuumban bepároljuk. A maradékhoz dietilétert adunk, és nátriumhidroxidon vákuumban szárítjuk. Ezután 18 ml dimetilformamidot adunk hozzá, trietilaminnal a pH-t 7,5-re állítjuk be, majd 100 mg 1-hidroxibenzotriazolt és 1,54 g BOC-Gln-ONP-t adunk hozzá, és 2 napig szobahőmérsékleten keverjük. A keverés alatt N-metilmorfolin hozzáadásával a pH-t 7,5-nek tartjuk. Ezután további 0,2 g BOC-Gln-ONP-t adunk hozzá, a pH-t 7,0-ra állítjuk be, és a keverést éjjelen át tovább folytatjuk. A reakció befejeződése után nagy mennyiségű vizet adunk a reakciókeverékhez, mire a termék kiválik. Metanol és dietiléter elegyéből háromszor átkristályosítva 4,8 g (82,9%) cím szerinti vegyületet kapunk. Olvadáspontja 178-182°. Rf2 = 0,67. [a]2® - -15,19l (c=l, dimetilformamid). 16) BOC-Lys(DIP)-Leu-OBzl 200 ml dildórmetánban feloldunk 38,9 g BOCLys(DIP)-OH-t és 43,3 g H-Leu-OBzl.Tos-OH-t, majd -5°-on hozzáadunk 20 ml N-etil-N’ -dimetilaminopropil-karbodiimidet, és ezen a hőmérsékleten 1 óra hosszat és szobahőmérsékleten éjjelen át keverjük, majd vákuumban bepároljuk. A kapott maradékot etilacetáttal extraháljuk, a kivonatot egymásután n sósavval, 5 %-os vizes nátriumhidrogénkarbonát-oldattal és vízzel mossuk, majd vízmentes magnéziumszulfáton szárítjuk, és vákuumban bepároljuk. A kivált kristályokat etilacetát és n-hexán elegyéből átkristályosítva 52 g (88,1 %) BOC-Lys(DlP) -Leu-OBzl-t kapunk. Olvadáspontja 100—102°. Vékony - rétegkromatogramja egyetlen foltot mutat. R1 =0,53. 17) BOC-His-Lys(DlP) - Leu-OBzl 110 ml trifluorecetsavhoz -5°-on hozzáadunk 17,8 g BOC-Lys(DIP)-Leu-OBzl-t, 40 percig keverjük, majd vákuumban bepároljuk. A maradékot nátriumhidroxid fölött vákuumban szárítjuk, majd 150 ml tetrahidrofuránt és hűtés közben—5°-on trietilamint ®s 4,9 g 1-hidroxibenzotriazolt és végül 14,8 g BOC-His(Tos>OH-t és 6,6 ml N-etil-N’-dimetilaminopropil-karbodiimidet adunk hozzá. A reakciókeverék pH-ját 4,0-ra állítjuk be, és —5°-on 1 óra hosszat, majd szobahőmérsékleten éjjelen át keverjük. A reakció befejeződése után a reakciókeveréket vákuumban bepároljuk, a maradékhoz etilacetátot adunk, és egymásután n sósavval, n nátriumhidrogénkarbonát-oldattal és vízzel mossuk. A szerves réteget vízmentes magnéziumszulfáton szárítjuk, vákuumban bepároljuk, a maradékot kovasavgél oszlopon kromatografáljuk, és eluálószerként 5:2:5 arányú kloroform, etanol és etilacetát elegyet használunk. Az eluált frakciókat kovasavgélen vékonyrétegkromatografálással vizsgálva és a fenti oldószerrendszert használva, az aktívnak talált frakciókat egyesítjük. Ezeket a frakciókat vákuumban bepárolva és a maradékot etilacetát és n-hexán elegyéből átkristályosítva, 19,7 g cím szerinti vegyületet kapunk. Olvadáspontja 214—216,5° (bomlik). Vékonyrétegkromatografálással egyetlen foltot kapunk. R, = 0,16. [a j2® = -26,3° (c=l, dimetilformamid). 18) BOC-Leu-His-Lys(DIP)-Leu-OBzl 8,7 g BOC-His-Lys(DlP)-Leu-OBzl-hez —5°-on hozzáadunk 30 ml trifluorecetsavat, 30 percig keverjük, majd vákuumban bepároljuk, és a kapott olajos maradékot nátriumhidroxidon vákuumban szárítjuk. Ezután hozzáadunk 10 ml dimetilformamidot, a pH-t —5°-on trietilamin hozzáadásával 7,5-re állítjuk be, hozzáadunk 1 g 1-hidroxibenzotriazolt, és 4,7 g BOC-Leu-OSU-t, és—5°-on fél óra hosszat, majd szobahőmérsékleten 3 napig keverjük. A reakciókeverékhez nagy mennyiségű vizet adunk, a kivált csapadékot szűréssel elválasztjuk, és etilacetátban oldjuk. Az oldathoz 1 ml N,N’-dime til amino-1,3-propándiamint adunk, és 30 percig keverjük. Az etilacetátos réteget egymásután n sósavval, n nátriumhidrogénkarbonát-oldattal és végül vizzel mossuk. A szerves réteget vízmentes nátriumszulfáton szántva vákuumban bepároljuk. Az így kapott poralakú anyagot kovasavgél oszlopon kromatografáljuk, eluálószerként 5:2:5 arányú kloroform, etanol és etilacetát elegyet használunk, az eluátumot kovasavgélen vékonyrétegkromatografálással azonosítjuk. A kívánt terméket tartalmazó frakciókat összegyűjtve, vákuumban bepárolva és etilacetátból átkristályosítva 7,3g(72,7%) cím szerinti vegyületet kapunk. Olvadáspontja 94-98,5° . R2 = 0,37; R* =0,59. [a]2^ =-28,5° (c=2, dimetilformamid) 19) BOC-Leu-His-Lys(DIP)-Leu-OH 16,2 g BOC-Leu-His - Lys(DIP)-Leu-OBzl-t feloldunk 300 ml metanolban, és katalitikus mennyiségű, 5 % palládium tartalmú szén jelenlétében 10 óra hosszat hidrogénezzük. A reakció befejeződése után a katalizátort szűréssel eltávolítjuk, és a maradékot vákuumban bepároljuk. A maradékot metanolban oldjuk, és a kocsonyásán kivált anyagot szűréssel elválasztjuk, majd kevés kloroformot tartalmazó metanol és dietiléter elegyéből átkristályosítva 12,5 g (86,8 %) cim szerinti vegyületet kapunk. R 2 = 0,18. 20) BOC-Leu-His-Lys(DiP) -Leu-Gln-Thr(Bzl) -Tyr(Bzl) -Pro-Arg(Tos) -Thr(Bzl)-Asp(OBzl)-Val-Gly-Ala-Gly-Thr(Bzl)-Pro -NH2 4,5 g BOC-Gln-Thr(Bzl>Tyr(Bzl) -Pro-Arg(Tos) -Thr(Bzl )-Asp(0Bzl)-Val -Gly-Ala-Gly -Thr (Bzl)-Pro-NH2-hoz —5”-on hozzáadunk 30 ml trifluorecetsavat, 45 percig keverjük, majd vákuumban bepároljuk. A maradékhoz dietilétert adunk, és nátriumhidroxid fölött vákuumban szárítjuk. 16 ml dimetilformamidot adunk hozzá, —5°-on trietilamin hozzáadásával a pH-t 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 9
