174649. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új kalcitonin-származék előállítására
13 174649 14 n-hexánnal eldörzsöljük, mire az megszilárdul. Etilacetát, tetrahidrofurán és n-hexán elegyéből átkristályosítva 72 g (97,4 %) BOC-Ala-Gly-OH-t kapunk. Olvadáspontja 129—132°. Vékonyrétegkromatografálással egyetlen foltot kapunk. [°]2D1 —8.87° (c=l, dimetilformamid). 4) BOC-Ala-Gly-Thr(Bzl)-Pro-NH2 30 ml trifluorecetsavhoz -5°-on hozzáadunk 10,0 g BOC-Thr(Bzl)-Pro-NH2-t, 30 percig keverjük, majd vákuumban bepároljuk. A maradékhoz -Thr(Bzl)-Asp(OBzl)-Val-Gly-Ala-Gly-Thr(Bzl)-Pro-NH2 dietilétert adunk, a csapadékot szűrőn elválasztjuk, és nátriumon szárítva H-Thr(Bzl)-Pro-NH? .TFA-t kapunk. 100 ml tetrahidrofuránhoz hozzáadjuk a 3) pont szerint előállított 6,08 g BOC-Ala-Gly-OH-t és 3,34 g 1-hidroxi benzotriazolt, majd—5°-on hozzáadunk 4,5 ml 4,0 pH-ju N-etil-N’ -dimetilaminopropil-karbodiimidet, és 1 óra hosszat —5°-on, majd 7 óra hosszat szobahőmérsékleten keverjük és —5°-on hűtve 0,8 ml N-etil-N’-dimetilaminopropil -karbodiimidet adunk hozzá, pH-ját 4,0-ra állítjuk be, és 1 óra hosszat -5°-on, majd éjjelen át szobahőmérsékleten keverjük. Vákuumban bepároljuk, a maradékot 400 ml etilacetátban feloldjuk, és egymás után telített nátriumklorid-oldattal, kétszer 100 ml 5 %-os vizes nátriumhidrogénkarbonát - oldattal, nátriumkloriddal telített 100 ml n sósavval és 50 ml vízzel mossuk. Az etilacetátos réteget vízmentes nátriumszulfáton szárítjuk és a vizes réteget kloroformmal extraháljuk. A kloroformos kivonatot vízzel kétszer mossuk, és az etilacetátos réteggel egyesítjük. Az egyesített szerves rétegeket vákuumban bepároljuk és a maradékot 150 g kovasavgélen kromatografáljuk. Az oszlopon etilacetátot és metanolt vezetünk át. A metanolos eluátumot vákuumban bepároljuk, a maradékhoz n-hexánt adunk, hogy a BOC-Ala-Gly-Thr(Bzl)-Pro-NH2 kikristályosodjék. Olvadáspontja 106-116 °. Kitermelés 11,5 g(87,3%). Vékonyrétegkromatografálással egyetlen foltot kapunk. R/ = 0,29; R5 = 0,52. 5) BOC-Val-Gly-OEt. 1 liter etilacetáthoz hozzáadunk 219,2 g BOC-Val-OH-DCHA-t. A kapott oldatot kétszer 600 ml n sósavval, majd 500 ml vízzel mossuk, vízmentes nátriumszulfáton szárítjuk, és vákuumban bepároljuk. A kapott maradékhoz 100 ml tetrahidrofuránt és 400 ml diklórmetánt, majd —5°-on hűtve 69,8 g H-Gly-OEt.HCl-t, 70 ml trietilamint és 103,2 g diciklohexilkarbodiimidet adunk hozzá, és —5°-on 1 óra hosszat, majd éjjelen át szobahőmérsékleten keverjük. Ezután a reakciókeverékhez 10 ml ecetsavat adunk, 1 óra hosszat keverjük, majd szűrjük. A szüredéket egymásután kétszer 500 ml n sósavval, kétszer 500 ml 5 %-os vizes nátriumhidrogénkarbonát-oldattal, majd vízzel mossuk. Vízmentes nátriumszulfáton szárítjuk, és vákuumban bepároljuk. A kapott maradékot etilacetát és n-hexán elegyéből háromszor átkristályosítva 105,4 g (69,7 %) BOC-Val-Gly-OEt-t kapunk. Olvadáspontja 95—96°. 6) BOC-Val-Gly-OH 150 ml metanolban feloldunk 96,8 g BOC-Val-Gly-OEt-t, majd -5°-on hozzáadunk 368 ml n nátriumhidroxid- oldatot, és a reakciókeveréket 1 óra hosszat keverjük. A pH-t n sósavval 8,0-ra állítjuk be, a metanolt vákuumban ledesztilláljuk, és a vizes réteget 100 ml dietiléterrel mossuk. A vizes réteg pH-ját n sósavval (2,0-ra állítjuk be, és négyszer 200 ml etilacetáttal extraháljuk. Az etilacetátos kivonatot vízmentes nátriumszulfáton szárítjuk, majd vákuumban bepároljuk. A maradékhoz n-hexánt adva és etilacetát és n-hexán elegyéből átkristályosítva 85^5 g (97,4 %) BOC-Val-Gly-OH-t kapunk. Olvadáspontja 112—117° (bomlik). Vékonyrétegkromatografálással egyetlen foltot kapunk. Rf* = 0,35. 7) BOC-Val-Gly-Ala-Gly-Thr(Bzl)-Pro-NH2 35 ml trifluorecetsavhoz — 5°«n hozzáadunk 10,5 g BOC-Ala-Gly-Thr(Bzl)-Pro-NH2 -t, 30 percig keverjük, és vákuumban bepároljuk. "A maradékhoz dietilétert adunk, a keletkezett csapadékot szűréssel elválasztjuk, és vákuumban nátriumhidroxidon szárítva H-Ala-Gly-Thr(Bzl)- Pro-NH2 .TFA-t kapunk. Ehhez a termékhez 100 ml tetrahidrofuránt és —5°-on trietilamint adva, pH-ját 5,0-ra állítjuk be, és ezután 5,49 g BOC-Val-Gly- OH-t és2,66 g 1-hidroxibenzotriazolt adunk hozzá. Ezt a reakciókeveréket —5°-on hűtjük, hozzácsepegtetünk 3,61 ml N-etil-N’-dimetilaminopropil-karbodiimidet, és —5°-on 1 óra hosszat, majd szobahőmérsékleten éjjelen át keverjük. Vákuumban való bepárlás után a kapott maradékot 300 ml kloroformban oldjuk, az oldatot egymásután kétszer nátriumkloriddal telített 200 ml n sósavval, kétszer nátriumkloriddal telített 200 ml 5 %-os vizes nátriumhidrogénkarbonát-oldattal és a 75 ml telített nátriumklorid-oldattal mossuk. Vízmentes nátriumszulfáton szárítjuk, és a szerves réteget vákuumban bepároljuk. A maradékot metanol és dietiléter elegyéből átkristályosítva 12,0 g (88,3 %) BOC-Val-Gly-Ala-Gly-Thr(Bzl)-Pro-NH2-t kapunk. Olvadáspontja 121 — 135° (bomlik). Vékonyrétegkromatografálással egyetlen foltot kapunk (5. oldószerrendszerrel). [a]p = -40,30° (c=l, dimetilformamid). 8.)BOC-Asp(OBzl)-Val-Gly-Ala-Gly-Thr(Bzl>Pro-NH, 33,1 g BOC-Vai-Gly-Ala-Gly-Thr(Bzl)-Pro-NH2- -hoz —5°-on hozzáadunk 100 ml trifluorecetsavat, 30 percig keverjük, majd vákuumban bepároljuk. A maradékhoz dietilétert adunk, és a kapott csapadékot nátriumhidroxidon vákuumban szárítjuk. Hozzáadunk 80 ml dimetilformamidot, és trietilamin hozzáadásával a pH-t 7,5-re állítjuk be. Ez után a reakciókeverékhez 950 ml 1-hidroxibenzotriazolt és 30,2 g BOC-Asp(OBzl)-OSU-t adunk. N-metilmorfolin hozzáadásával a pH-t 7,5-'re állítjuk be, 2 napig keverjük, és a keverés során a pH-t N-metilmorfolin hozzáadásával 7,5-ön tartjuk. Ezután újra 2,0 g BOC-Asp(OBzl)- OSU-t adunk hozzá, a pH-t N-metiimorfolinnal 7-re állítjuk be, és éjjelen át keverjük. Ezután a reakciókeverékhez nagy mennyiségű vizet adunk, a kivált ragadós anyagot dekantálással elválasztjuk, és dietiléterrel eldörzsöljük, mire az anyag kristályosán kiválik. A vizes réteget kloroformmal extraháljuk, és a kivonatot vákuumban bepároljuk, a maradékhoz vizet adunk, hogy a gumiszerű anyag kicsapódjék. Ez a gumiszerű anyag dietiléterrel eldörzsölve kristályosán kiválik. Az egyesített szilárd termékeket metanol és dietiléter elegyéből négyszer átkristályosítva, majd forró etilacetát- dietiléter eleggyel mosva és szárítva 34,2 g (79,6%) cím szerinti vegyületet kapunk. Olvadáspontja 195-199°. Vé-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 7
