174649. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új kalcitonin-származék előállítására
27 174649 28 n-hexán elegyéből, majd háromszor dietiléter és n-hexán elegyéből átkristályosítjuk. A kapott terméket 180 g kovasavgélt tartalmazó oszlopon kromatografáljuk, 2:1 arányú etilacetát és benzol" elegyével mossuk, és metanollal eluáljuk. A metanolos eluátu- 5 mot vákuumban bepároljuk. A maradékot etilacetát és n-hexán elegyéből átkristályosítva 5,25 g (74,5 %) BOC-Lys(ClCbz) -Leu-Ser (Bzl)-OH-t kapunk. Olvadáspontja 84-100° (bomlik). Vékony re "egkromatografálással egyetlen foltot ad. Aminosavelemzés: 10 Lys 0,98(1); Leu 1,00(1); Ser 0,82 (1). f) BOC-Lys(ClCbz)-Leu-Gln-Thr(Bzl)-Tyr(Bzl)-Pro- Arg(Tos-Thr(Bzl)-Asp(OBzl)-Val-Gly-Ala-Gly-Thr( Bzl )-Pro-N H 2 Az 1. példa 15) szakasza szerint előállított 7,65 g 15 BOC-Gln-Thr(Bzl)-Tyr(Bzl) -Pro- Arg(Tos)-Thr (Bzl)-Asp(OBzl)-Val-Gly-Ala-Gly -Thr (Bzl)-Pro-NH2-t —5 -on 35 ml trifluorecetsavban oldjuk, 30 percig keverjük, majd vákuumban bepároljuk. A maradékhoz dietilétert adunk, és a csapadékként kapott 20 terméket vákuumban nátriumhidroxidon szárítjuk, majd 25 ml dimetilformamidban feloldjuk. Ehhez az oldathoz -5°-on hozzáadunk 600 mg 1-hidroxibenzotriazolt, a b) pont szerint előállitott 2,35 g BOC-Lys(ClCbz)-Leu-OH-t és 0,69 m N-etil-N’-dime- 25 tilaminopropil-karbodiimidet, 1 óra hosszat -5°-on, majd éjjelen át szobahőmérsékleten keverjük. A reakciókeverékhez n sósavat adva, a termék kiválik. Kétszer metanol és dietiléter elegyéből átkristályosítva és szárítva 8,0 g (87,3 %) cím szerinti vegyületet 30 kapunk. Olvadáspontja 164° fölött van (bomlik). [ajp5 = 18,65° (c=l, dimetilformamid). g) BÜC-Leu-His-Lys(ClCbz)-Leu-Gln-Thr(Bzl)-Tyr(Bzl)--Pro-Arg(Tos)-Thr(Bzl)-Asp(OBzl)-Val-Gly-Ala-Gly-Thr(Bzl)-Pro-NH2 35 A fenti (/pont szerint előállitott 7,68 g BOC-Lys (ClCbz)-Leu-Gln-Thr(Bzl )-Tyr(Bzl)-Pro-Arg(Tos)-Thr(Bzl)-Asp(OBzl)-Val -Gly-Ala-Gly-Thr (Bzl)-Pro-NH2-t -5°-on 35 ml trifluorecetsavban feloldjuk, 30 percig keverjük, majd vákuumban bepároljuk. A 40 maradékot 20 ml dimetilformamidban oldjuk, az oldat pH-ját trietilaminnal 5-re állítjuk be, —5°-on hozzáadunk 430 mg N-hidroxiszukcinilimidet, 1,37 g BOC-Leu-His-OH-t és 58 ml N-etil-N’ -dimetilaminopropil-karbodiimidet, majd 1 óra hosszat ezen a 45 hőmérsékleten és éjjelen át szobahőmérsékleten keverjük. A reakciókeverékhez n sósavat adunk, és a kivált csapadékot metanol és dietiléter elegyéből, és dimetilformamid és dietiléter elegyéből ismételten leválasztjuk. A terméket szárítva, 8,30 g (98,2 7) cím 50 szerinti vegyületet kapunk. Olvadáspontja 167-175°. [ajtf, = —17,45“ (c=l. dimetilformamid). h) BOC-Glu(OBzl)-Leu-His-Lys(ClCbz)-Leu-Gln-Thr(Bzl)-Tyr(Bzl)-Pro-Arg(Tos)-Thr(Bzl)-Asp(OBzl)- 55 Val-Gly-Ala-Gly-Thr(Bzl)-Pro-NH2 A fenti g) pont szerint előállított [16-32] aminosavakból álló 7,64 g heptadekapeptidamidot -5°-on 35 ml trifluorecetsavban feloldjuk,40 percig keverjük, és vákuumban bepároljuk. A maradékot 30 ml dime- 60 tilformamidban feloldjuk, az oldat pH-ját N-metilmorfolinnal 7-re állítjuk be, majd hozzáadunk 70 g 1-hidroxibenzotriazolt és 1,82 g BOC-Glu (OBzl)-OSU-t, majd a pH-t N-metilmorfolinnal újra 7-re állítjuk be. A reakciókeveréket 2 napig szobahőmér- 65 sékleten keverjük, majd n sósavat adunk hozzá. A kivált csapadékot metanol és dietiléter elegyéből kétszer átkristályosítva és szárítva 7,55 g (92,5 %) cím szerinti vegyületet kapunk. Olvadáspontja 161-169° (bomlik). Aminosavelemzés: His 0,83 (1), Arg 1,05 (1) Asp 1,08 (1 ), Thr 2,52 (3), Glu 2,06 (2), Pro 2,16 (2) Gly 2,00(2), Ala 1 J06(l), Val 1,10(1), Leu 1,82(2) ’ Tyr 0,73(1), i) BOC-Gln-Glu(OBzl)-Leu-His-Lys(ClCbz)-Leu-Gln- Thr(Bzl)-Tyr(Bzl)-Pro-Arg(Tos)-Thr(Bzl)-Asp(OBzl) Val-Gly-Ala-Gly-Ihr(Bzl)-Pro-NH2 A h) pont szerint előállított, [15-32] aminosavakból álló, 7,29 g oktadekapeptidamidot -5°-on30ml trifluorecetsavban feloldjuk, 45 percig keverjük, majd vákuumban bepároljuk. A maradékot 15 ml dimetilformamidban feloldjuk, az oldat pH-ját N-metilmorfolinnal 7-re állítjuk be, majd hozzáadunk 100 mg 1-hidroxibenzotriazolt és 1,4 g BOC-Gln-ONP4, és éjjelen át szobahőmérsékleten keverjük. A reakciókeverékhez ezután n sósavat adunk, a keletkezett csapadékot szűréssel elválasztjuk, és vízzel mossuk. Az átkristályosítási műveletet háromszor megismételve, szárítás után 7,00 g (91,5 %) cím szerinti vegyületet kapunk. Olvadáspontja 171-175° (bomlik). j) BOC-Lys(ClCbz)-Leu-Ser(Bzl)-Gln-Glu(OBzl>Leu-His-Lys(ClCbz)-Leu-Gln-Thr(Bzl)-Tyr(Bzl)-Pro-Arg(Tos)-Thr(Bzl)-Asp(OBzl)-Val-Gly-Ala-Gly-Thr(Bzl)-Pro-NH2 Az i) pont szerint előállított, [14-32] aminosavakból álló 6,70 g nonadekapeptidet -5°-on 30 ml trifluorecetsavban feloldjuk, hozzáadunk 2,2 ml 4 n sósav-dioxán-elegyet, és 45 percig szobahőmérsékleten keverjük, majd vákuumban bepároljuk. A maradékhoz dietilétert adunk, a kapott csapadékot dietiléterrel alaposan mossuk, és nátriumhidroxidon vákuumban szárítjuk. Az így kapott terméket 15 ml dimetilformamidban feloldjuk, az oldat pH-ját N-metilmorfolinnal 5,5 —ónra állítjuk be, hozzáadunk 360 mg 1-hidroxibenzotriazolt, 1,86 g BOC-Lys(ClCbz)-Leu -Ser (Bzl) -OH-t és 5 ml dimetilformamidban oldott 540 mg diciklohexil-karbodiimidet, 1 óra hosszat keverjük, majd a keverést éjjelen át tovább folytatjuk. Ezután a reakciókeverékhez n sósavat adunk, és a kivált csapadékot szűréssel elválasztjuk. A kapott csapadéknak etanolban oldhatatlan részét és a szüredékből dietiléter hozzáadására kinyert csapadékot egyesítjük, metanol és dietiléter elegy ét adjuk hozzá, és a csapadékot metanol és dietiléter elegyéből ismételten átkristályosítva 7,0 g (87,6 %) cím szerinti vegyületet kapunk. Olvadáspontja 171-177° (bomlik), [a]1^ =-18,45°, (c=l, dimetilformamid). Aminosavelemzés: Lys 1,86 (2), His 0,74 (1), Arg 0,97 (1), Asp 1,04 (1), Thr 2,55 (3), Ser 0,53 (1), Glu 2,85(3), Pro 2,08 (2), Gly 2,00(2), Alá 1,04(1), Val 1,04(1), Leu 2,67(3), Tyr 0,67(1). SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás az I képletű [Ï 2 3 4 5 6~] 7 8 9 10 11 12 H-Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 Ser-Gln-Glu-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr 26 27 28 29 30 31 32 Asp-Val-Gly-Ala-Gly-Thr-Pro-NH2 14
