174606. lajstromszámú szabadalom • Eljárás tripeptidek előállítására
17 174606 18 2-keto-piperidin-6-karbonil-(DNP)-hisztidi]-tiazolidin-4-karbonsavamid előállítása 11,9g (0,0234 mmól) (DNP)-His-Tca-NH2 •-2HC1, 3,72 g (0,026 mól) L-2-oxo-piperidin-6-karbonsav és 5,96 g (0,039 mól) N-hidroxi-benztriazol-hidrát 450 ml metiléndikloriddal készített szuszpenziójához szobahőmérsékleten 8 perc alatt 6,95 g (0,034 mól) diciklohexil-karbodiimidet adunk. A reakcióelegyhez 7,5 ml (0,052 mól) trietilamint adunk, majd mágneses keverővei kevertetjük. 5 perc elteltével gyakorlatilag minden kiindulási anyag feloldódik, majd az oldatot 6,5 ml (0,045 mól) trietilaminnal pH = 7,2 értékre lúgosítjuk. A reakció 1 óra alatt játszódik le. A szemcsés diciklohexilkarbamidot szűrjük, a szűrletet 75 ml-ig vákuumban bepároljuk és a terméket 250 ml petróleum-éterből kristályosítjuk. A kristályos terméket a reagálatlan DCCI eltávolítására metiléndikloridból petróleum-éterrel kétszer átkristályosítjuk, 28,5 g mézgaszerű nyers terméket kapunk, melyet tisztítás céljából 75 : 25 : 2,5 térfogatarányú kloroform-metanol-víz elegyben oldunk, az oldatot szilikagéllel töltött oszlopra visszük (szilikagél : tripeptid = 75/l) és az oszlopot a fenti oldószer eleggyel 70 ml/45 sec sebességgel eluáljuk. G lépés: 2-keto-piperidin-6-karbonil-hisztidil--tiazolidin-4-karbonsavamid 17 g (0,0304 mól) KPc-(DNP)-His-Tca-NH2 540 ml dimetilformamidban készített oldatát 30 percig szobahőmérsékleten 60 ml etilmerkaptánnal reagáltatjuk. Az oldatot vákuumban bepároljuk, a kapott 29 g olajos maradékot 2,2 kg szilikagéllel töltött oszlopon kromatografáljuk, eluálószerként 70 :30 : 3 térfogatarányú ldoroform-metanol-ammónium-hidroxid elegyet használunk. A terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük, majd bepároljuk és liofilizáljuk. 10,72 g (90%) 99%-os tisztaságú terméket kapunk. Rf = 0,26(A). Hasonlóan állíthatjuk elő az L-Kpc-L-His-L—Pro—NH2 -t Rf = 0,42(A). Az (I) általános képletű vegyületek antidepresszáns aktivitással és a tireotropin hormon felszabadulását serkentő hatással rendelkeznek. Az (I) általános képletű vegyületek antidepresszáns hatásukat a központi idegrendszer izgatásán keresztül fejtik ki. A vegyületek antidepresszáns hatását in vivo körülmények között, pikolinsawal előkezelt egereken vizsgáltuk. E vizsgálat során azt határoztuk meg, hogy az (I) általános képletű vegyületek képesek-e visszaállítani a metazolamid antikonvulzáns hatását. Az (I) általános képletű vegyületek tireotropin hormon felszabadulását serkentő hatását in vivo körülmények között, Harris és munkatársai módszerével [„Vitamins and Hormoné”, 29, 3-4 (1971)] vizsgáltuk. Néhány (I) általános képletű vegyület - a TRH-tól eltérően — lényegesen nagyobb mértékű antidepresszáns hatást fejt ki, mint a vegyület F lépés: tireotropin hormon felszabadulását serkentő hatása. E vegyületeket megfelelő dózisban adagolva igen előnyösen használhatjuk fel a depresszió kezelésére, anélkül, hogy a kezelés során túlzott mértékű tireotropin-hormonfelszabadulást idéznénk elő. Az (I) általános képletű vegyületek farmakológiái vizsgálatának eredményeit, az 1. táblázatban közöljük. A táblázatban megadott számadatok az összehasonlító vegyületként felhasznált TRH-hoz viszonyított aktivitás-értékek. A táblázatban alkalmazott rövidítések jelentése a következő: AD= antidepresszáns hatás TS = tireotropin hormonfelszabadulást serkentő hatás in = a vizsgált dózisban lényegében inaktív 1. táblázat Sorszám Peptid TS AD TRH (kontroll) 1 1 1. L-2-keto-piperidin-6--karbonil-L-hisztidil-L-tiazolidin-4--karboxamid 1 8 2. L-2-keto-piperidin-6--karbonil-L-hisztidil--L-prolin-amid 1 4 3. DL-2-keto-piperidin-6-karbonil-L-hisztidil-L-prolin-amid 0,2 3 4. L-piroglutamil-DL-hisztidil-L-tiazolidin-4-karboxamid 0,2 2 5. L-piroglutamil-L-hisztidil-L-2-piperidin-karbonsav--metilészter 0,2 1 6. L-2-keto-imidazolidin-5-V'.rbonil-L--hisztidil-L-prolin-amid 0,1 1 7. L-piroglutamil-N3 ,m - -karboxirnetil-L-hisztidil-L-prolin-amid 0,1 1 8. D-2-keto-piperidin-6--karbonil-L-hisztidil-L-prolin-amid 0,1 0,25 9. 1^2-keto-piperidin-6--karbonil-L-hisztidil-L-2-piperidinkarbon-sav-metilészter 0,016 1 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 9
