174602. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szulfatált szaponinsók előállítására
3 174602 4 A találmány szerinti eljárásban az aescin molekula szulfátozását előnyösen addig folytatjuk, amíg a molekulába a vízmentes anyagra számítva körülbelül 12 s% szervesen kötött kén, elsősorban 11,2- -14,4súly%, különösen 12,8 s% szervesen kötött kén kerül. A találmány szerint előállított termékben az aescin molekula általában 7-9, előnyösen 8 kénsavészter-csoportot tartalmaz. A találmány szerinti eljárásban például 1 sr. aescinre 2,8-3,5, előnyösen 3,0 térfogatrész klórszulfonsavat és 8-10, előnyösen 10—15 térfogatrész szerves oldószert, elsősorban piridint használunk. Meglepő módon azt tapasztaltuk, hogy az alkalmazott reakciókörülmények között kapott aescin szulfátozott termék rendkívül hatékony farmakológiailag. Ettől eltérő mértékű szulfátozott termékek biológiai hatása nem kielégítő. A szulfátozott aescint a reakciókeverékből alkohollal, elsősorban etanollal választhatjuk le. Ezután ismert módon farmakológiailag elviselhető bázissal a megfelelő sóvá alakíthatjuk át, például vizes nátriumhidioxid-oldattal a nátriumsót kapjuk. Tisztítás után a polikénsav-észter-nátriumsó szilárd alakban barnásfehér por, amely 186 °C felett bomlik. A só vízben könnyen oldódik, metanolban nehezen oldódik, és 90%-os etanolban gyakorlatilag oldhatatlan. Az aescin-polikénsavészter-nátriumsó (a továbbiakban röviden aescin-PSNa-ként jelöljük) rendkívül alkalmas gyulladásos vagy degeneratív megbetegedések és traumás károsodások következtében létrejövő lokalizált duzzanatok perkután kezelésére. Az aescin-PSNa külsőleg alkalmazva a vérkeringést kifejezetten fokozza és egyidejűleg a vérkoagulációt gátolja és a gyulladást mérsékli. Ezért különösen alkalmas trombózist gátló és gyulladást mérséklő felhasználásra krémek, zselék, kenőcsök, oldatok stb. alakjában. Különösen célszerű lehet nem-szulfátozott aescinnel együtt alkalmazni. Ennek a szaponinnak a specifikus antiexszudatív tulajdonságait a találmány szerint előállított aescin-szárniazék trombózist gátló és gyulladást mérséklő hatása jól kiegészíti. Az aescin-PSNa heparinoid, azaz heparinszerű hatású hatóanyag. A heparinnal szemben az aescin-PSNa-nak az az előnye, hogy molekulasúlya a heparin 1/10-e, ezért lényegesen jobban hatol át a bőrön. Az aescin-PSNa-nak nemcsak trombózist gátló és fibrinolitikus hatása van, hanem a kötőszövet regenerációját is befolyásolja és a gyulladást mérséklő aescin hatását kiegészíti. Feltételezzük, hogy a heparin és különösen a kis molekulasúlyú heparinoidok a kötőszövet ragasztóanyagába beépülve a polimerizáció fokozódását és így a rugalmas szövetek vastagságát csökkentik, és így a polimerizáció mértéke gyakorlatilag a korai stádium polimerizációjának fokán maradhat. Ez a kötőszövet alapanyagának depolimerizációját, illetve helyettesítését jelentené. Az aescin-PSNa hidratációval a kénsavészterben elszegényedett alapszövet sarjad - zását fokozza. Az aescin-PSNa toxicitása nagyon csekély. Egereken intravénás beadással meghatározott akut toxicités LDso értáce 2,1 í ®’l 2 8/kg i,v- [Png8e» R. W. Schäfer, Arch, exper. tfath. und Pharmakói. 191, 281 (1939) és L. C. Miller és M. L. Tainter, Proc. Soc. Exper. Bioi. and Med. 57, 261 (1944) módszerével]. Az LDS0 értékét patkányokon meghatározva 1,2±0,07 g/kg i.v.-nek bizonyult. Nyíltakon végzett elviselhetőségi vizsgálatok során a kísérleti állatok 100—500 mg/kg i.v. aescin-PSNa injekciót jól tűrtek. Az aescin-PSNa-t a bőr nagyon jól elviseli, ezt törpemalacokon vizsgáltuk. Az egyes állatoknál és két állatnál meghatározott vérszérum-értékek a törpe malacoknál ismert fiziológiás szórási határokon belül voltak: összfehérje (kb. 6,4), albumin (55,8-61,6), c*i -globulin (1,7-3,7), a2-globulin (10,2-14,7), a3-globulin (3,2-4,2), 0-globulin (7,2—10,2), (3-globulin (13,2—15,2), timol-vizsgálat (0,5—1,0), összkoleszterin (54—94), szabad koleszterin (27-40), észter-koleszterin (14-56), szabad koleszterin/észter-koleszterin (0,68-2,9), koleszterin-észter (23,4-93,5), összfoszfatid (84—94,5), összkoleszterin/foszfatid (0,64-1,03), lipoid-foszfor (3,6—4,0), észterezett zsírsavak (114—150), összzsír (223-265), vas (93,0-118,8), GOT (22,9-31,9), GPT (17,2—32,1). A hatékonyság, elsősorban a bőrreszorpció és az ezt követő gyulladást mérsékelő hatás, valamint a vérkoagulációt gátló hatás vizsgálatát az ún. vérömleny-vizsgálatban, valamint a véna körüli szövet gyulladása során a bőr hőmérsékletének mérésével és az állandósult szubkután vérömleny reszorpciós idejének meghatározásával végeztük. A vérömleny vizsgálatnál intrakután fiziológiás nátriumklorid-oldatot használtunk, amelynek intenzitását az aescin-PSNa-val való kezelés előtt és után az idő függvényében reflexió-fotometrikusan határoztuk meg. Kitűnt, hogy az aescin-PSNa-t tartalmazó készítmények, például zselé, valamint, a nem-szulfátozott aescint is tartalmazó készítmények a felületi bevérzések reszorpcióját rendkívül kedvezően befolyásolják. A gyulladásos bőrfelület hőmérsékletének mérése és a mesterségesen kiváltott vérömleny felszívódásának vizsgálata egyértelműen bizonyította az aescin-PSNa kiemelkedő hatását. A következő példa szemlélteti a találmány szerinti eljárást. 1. példa 8,5 liter piridinbe alapos keverés és hűtés közben lassan 2,5 liter klórszulfonsavat vezetünk. A hőmérsékletet 50 °C alatt tartjuk. A klórszulfonsav bevezetése után az oldatot 75 °C-ra melegítjük, majd hozzáadjuk 0,8 kg aescin 2 liter piridinnel készült oldatát. Ezután 85 °C-ra melegítjük, és 10 percig ezen a hőmérsékleten keverjük. A reakciókeveréket ezután 70 liter meleg etanolhoz adjuk, és gyorsan alacsony hőmérsékletre, előnyösen legalább -10 °C-ra lehűtjük. A képződött észter mézszínű, sűrűnfolyó anyagként válik ki. Az etanol-piridin elegyet leszívatjuk, és az észtert etanollal több ízben mossuk. A tisztított észtert vízben teljesen feloldjuk, és 2n vizes nátriumhidroxid-oldattal Ifi pH-értékre állítjuk. Alkohollal leválasztva, majd tisztítva az aescin-PSNa4 lényegében kvantitatív kitermeléssel, 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
