174299. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kérődzők tápanyaghasznosításának fokozására alkalmas A-28 086 jelű antibiotikum A vagy D jelű összetevőit tartalmazó szarvasmarha-takarmány előállítására
25 174299 26 tására 10 ml inkubált vegetatív tenyészettel 400 ml, az előzővel azonos összetételű második vegetatív táptalajt oltunk. A második vegetatív tenyészetet 2 literes Erlenmeyer-lombikokban, 5,1 cm körkörös kitéréssel percenkénti 250-et forduló rázóasztalon 5 24 órán át 30 °C hőmérsékleten tenyésztjük. 800 ml kinőtt második vegetatív tenyészettel 100 liter steril, az alábbiakban megadott összetételű fermentációs táptalajt oltunk: Tápióka dextrin* 6,00% Enzimesen hidrolizált kazein** 0,60% Enzimesen hidrolizált kazein*** 0,20% Kalciumkarbonát 0,20% Magnéziumszulfát-heptahidrát 0,05% Melasz 1,50% Finom szójaolaj 5 mg/liter *Staley Dextrin 11, A. E. Staley Co., Decatur, 25 111. ** Amber EMC, Amber Laboratories, Juneau, Wise. WNZ Amine A, Sheffield Chemical Co., Norwich, N. Y. 30 A táptalaj pH-ja sterilezés után 6,8 ± 0,1, a sterilezést 121 C hőmérsékleten, 30 percen át, 6,8—9,1 atmoszféra nyomáson autoklávban végezzük. A beoltott termelő táptalajt 165 liter térfogatú 35 fermentorban 10—12 napon át 28 ± 1 °C hőmérsékleten tenyésztjük. A táptalajon percenként a táptalaj térfogatára számítva 0,4 térfogat steril levegőt vezetünk át. A táptalaj keverését percenként 300-at forduló, hagyományos keverővei végezzük. 40 18. példa Az A 28 086 komplexek előállítására megismé- 45 teljük a 17. példában megadott eljárást, azzal a különbséggel, hogy az alábbiakban megadott összetételű rázott tenyészet- és tankfermentor főfermentációs táptalajt használjuk. 50 Tápióka dextrin* 3,00% Finomított szójaolaj 0,50% Csapvíz 100 ml-re +Staley Dextrin No. 11, A. E. Staley Co., Decatur, 111. ** Amber EHC, Amber Laboratories, Juneau, Wise. +++NZ Amine A, Sheffield Chemical Co., Norwich, N. Y. A táptalaj pH-ja sterilezés után 6,4, a sterilezést autoklávban a 17. példában megadottak szerint végezzük. 19. példa A Streptomyces aureofaciens NRRL 8092 törzs által termelt A 28 086 komplex elkülönítése. 60 liter, a 17. példában megadott eljárással előállított teljes tenyészlé pH-ját híg hidrogénkloriddal 3-ra állítjuk be. Szűrési segédanyag (Hyflo Sper-cel, diatomaföld, Johns-Manville Products Corp.) jelenlétében szűrjük a savas tenyészlevet. 30 liter metanollal extraháljuk a szűrési maradékként kapott és 1,56 g nátriumhidrogénkarbonáttal kiegészített micéliumot, az extrakciót keveréssel végezzük. Elkülönitjük az extraktumot, majd 30 liter metanollal újra extraháljuk a micéliumot. Egyesítjük a két metanolos extraktumot, majd a metanol eltávolítására csökkentett nyomáson desztilláljuk. A desztillációs maradékként kapott körülbelül 7 liter térfogatú vizes oldat pH-ját híg hidrogénkloriddal 7,5-re állítjuk be. 2x7 liter etil-acetáttal extraháljuk az oldatot. Egyesítjük az etil-acetátos extraktumokat, és csökkentett nyomáson desztilláljuk, amikor desztillációs maradékként olajos terméket kapunk. 1500 ml acetonban oldjuk az olajos desztillációs maradékot, majd 1500 ml vizet adunk az oldathoz. Híg hidrogénkloriddal 3-ra állítjuk be az elegy pH-ját, majd 1 órán át keverjük. Szűréssel elkülönítjük a kivált csapadékot, 1500 ml acetonban oldjuk a szűrési maradékot, és 400 ml vizet adunk az oldathoz. Ezt az elegyet 16 órán át állni hagyjuk, amiután kristályos terméket kapunk. Szűréssel elkülönítjük a kristályokat, és csökkentett nyomáson szárítjuk, amiután 74 g nyers, kristályos, A 28 086 A-t és D-t, továbbá más kristályos szennyezőanyagokat tartalmazó terméket kapunk. Glükóz 1,50% Enzimesen hidrolizált kazein** 0,30% Enzimesen hidrolizált kazein*** 0,10% 40 g ilyen kristályos terméket 250 ml benzolban oldunk. 9x120 cm méretű, szilikagélből (Grace- 55 -Davidson, grade 62) készült kromatografáló oszlopra öntjük az oldatot. Az eluálást 40-40 liter, következő összetételű oldószereleggyel végezzük: Élesztőkivonat 0,25% Kalciumkarbonát 0,20% Magnéziumszulfát-heptahidrát 0,10% Melasz 1,50% 1. Benzol 60 2. Benzol és etilacetát, 9 :1 3. Benzol és etilacetát, 4 :1 65 4. Benzol és etilacetát, 7 : 3 13
