174206. lajstromszámú szabadalom • Eljárás zöld növényi léből a citoplazma fehérjefrakció elválasztására
3 174206 4 sa a legelőnyösebb. A savas oldat rendszerint literként 20-40 g kitozánt tartalmaz, az oldat pH-értéke 5,0-5,5, így a fehérje kicsapása 5,0—6,0 pH-érték-tartományban történhet. A víztartalmú növényi nyersanyag fehérjekoncentrációjától füg- 5 gően lg össznyersfehérjére, 0,02—0,15 g kitozán alkalmazása elegendő. Az egyszerűség kedvéért a kitozán mennyiségét 1 liter fehéijeanyagra gramban számítjuk. Mivel a kitozánt előnyösen savas oldat alakjában adagoljuk, így a vizet tartalmazó növényi 10 nyersanyag 5,7 és 6,1 közötti természetes pH-értéke módosul, összefüggés állapítható meg a kinyerhető összfehérje mennyisége (citoplazma és kloroplaszt-frakció) és a kitozán hozzáadása után kapott lé pH-értéke között, ugyanakkor összefüggés áll 15 fenn a pH-érték és a felülúszó részből kinyerhető citoplazma, mennyisége között is. Ennek megfelelően az összes flokkulálással kicsapható fehérje mennyisége növekszik a pH csökkentése esetén, de a citoplazma, fehérje mennyisége csökken, ha a 20 pH-érték csökken. Abból a célból, hogy a két fehétjefrakció között ésszerű 'egyensúly álljon be, a kitozán hozzáadása után a fehérje oldat pH-értékét 5,3 és 6,5 célszerűen 6,0 pH-értékre állítjuk be. A kloroplaszt fehérjefrakció flokkulálását 40 °C 25 alatti például 10—20 °C közötti hőmérsékleten végezhetjük, célszerűen kitozán hozzáadása és élénk keverés közben, amely után egy ülepítési szakaszt iktatunk be. A flokkulált csapadékot legcélszerűbben centrifugálással választjuk el, azonban az elvá- 30 lasztás más fizikai módszerei, így szűrés és dekantálás is alkalmazható. Az elválasztott kloroplaszt fehérjefrakció különösen alkalmas állatok takarmányához való bekeverésre. A kitozán visszanyerhető oly módon, hogy a kloroplaszt fehérjefrakciót vizes közegben 4-5 közötti pH-értéken szuszpendáljuk. A szuszpenzió centrifugálása esetén a kitozán a felülúszó oldatban marad és 7 pH-értékre történő beállítással kicsapható. A kicsapott kloroplaszt fehérjefrakció elválasztása után kapott felülúszó fázist különböző módszerekkel kezelhetjük, hogy az oldható citoplazma fehérjefrakciót kinyerjük. Az egyik különösen előnyös módszer szerint a felülúszó fázist melegítjük, a fehérjét koaguláltatjuk, majd a koagulálódó fehérjét a szokásos fizikai módszerekkel pl. ultraszűréssel kinyerjük. Ha a citoplazma fehérjefrakciót tartalmazó felülúszó fázist körülbelül 2 percig 80 °C körüli hőmérsékleten melegítjük, akkor különösen kedvező eredményt érünk el. A hő hatására nem denaturálódott citoplazma, fehérjefrakció előnyösen visszanyerhető a felülúszó fázisból. Alternatív módon a feloldott fehérjefrakciót úgy is kicsaphatjuk, hogy a pH-értéket 4,0 körülire állítjuk be. A kinyert citoplazma, fehérjefrakciót ezután mossuk és szárítjuk, amikor halványsárga színű porszerű anyaghoz jutunk. Ez az anyag alkalmas arra, hogy különböző élelmiszerekbe és italokba bekeverjük. A következő példák a találmány szerinti eljárást szemléltetik, a megadott %-os értékeken súly% értendő. 1. táblázat Kísérlet száma Kitozán kicsapószer mennyisége g/liter lé A lé pH-értéke a kitozán hozzáadása után A citoplazma fehétjefrakció mennyisége g/liter lé 2A 1,0 5,7 11,0 2B 2,2 5,5 9,2 2C 3,5 5,4 8,0 2D 7,0 5,3 6,8 2Exx 0,5 5,8 12,0 2Fxx 2,0 5,4 6,0 2Gx 2a 5,2 10,0 2H 2 a 5,5 13,5 21 2 a 5,7 16,5 2J 2 a 6,5 13,5 2Kx 2 a 7 a 12,9 x friss növényi lé xx mélyhűtött és megolvasztott lé
